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一种可快速感受机械力的传感器细胞的理论设计方案 　　【摘 要】本文利用了两类可对细胞所受机械力进行响应并介导钙离子从细胞外流入胞质的钙离子通道，从理论上设计一种可响应所受机械力并迅速将机械力转换成适当频率和强度的荧光信号的传感器细胞。基于此种理论基础，研究了胞质钙离子异常升高诱导的细胞凋亡的两条信号通路。可以敲低或敲除钙凋亡途径中的相关分子，抑制机械力刺激产生的钙离子内流诱发的凋亡作用，从而可以使传感器细胞稳定传代。 　　【关键词】机械力；传感器；细胞；融合蛋白 　　生物发酵工程中最常用的工程细胞是各种细菌，放线菌，真菌，酵母等微生物。但是生产一些具有较多转录后修饰的代谢物质，如干扰素，各种细胞因子，糖蛋白，激素等，则不能使用微生物，因为微生物缺乏相关的修饰功能，生产出的物质往往没有活性。因此必须使用动物细胞。而动物细胞由于对环境比较敏感，比较难在大型生物反应器中培养。而难以在反应器中培养的一个原因是缺乏能直接反映细胞生理状态的参数的检测。众所周知，生物反应器的标准检测参数是温度，ph，融氧，以及搅拌器转速。但是以这些有限的物理、化学参数来对应于细胞内复杂而众多的生理状态，显然是无法精确反应实际情况的，尤其是对环境比较敏感的动物细胞，往往是当细胞中众多的实际生理状态已经发生了剧烈变化，使细胞生长不佳甚至大量死亡后，上述的物理，化学参数才会有变化。因此，发酵中仅靠参数本身往往不能精确判断发酵状态，而是要依赖于操作者的经验。 　　为了能够解决这个问题，笔者考虑设计一种起传感器作用的细胞，它与用于合成代谢物质的细胞一同在生物反应器中培养，享受相同的环境。但是这种传感器细胞是经过改造的，它们能够将由于外界环境变化而导致自身内部发生改变的生理信号，直接转化成可被检测装置感受的特定的物理或化学信号，为生物反应器上相应的控制软件提供精确信息，从而对影响细胞生理状态的微环境进行精确检测，并利用即时的反馈调节对生物反应器参数进行精确控制。 　　而本论文研究的是机械力对动物细胞的影响。由于动物细胞没有细胞壁，对机械力是非常敏感的。然而动物细胞的生长及代谢物的合成都依赖氧气，在生物反应器中为了实现供氧，必须依赖于培养基的不断流动，翻滚，搅拌，这往往会产生变化剧烈的剪切力，损害细胞。因此，供氧和对剪切力的控制是一对矛盾体，必须平衡考虑。如果能培养出一种能感受所受机械力以及机械力对自身生理状态的影响，并迅速将其转变成特定频率的光信号的传感器细胞，必然对供氧和受力的控制这一过程提供很大帮助。 　　综上所述，本论文根据已有的研究内容，从理论上设计一种满足如上要求的，可感受机械力的传感器细胞，并提出每一步骤中笔者能想到的可能的处理方法。 　　1 钙离子通道感受机械力的机制研究 　　哺乳动物体内在生理条件下有很多种感受机械力的途径，典型如细胞粘附与胞外基质，其粘附产生的力调控细胞的分化与凋亡；血管内皮细胞与胞外基质粘附，当血液流速过快或血管腔过窄时（即高血压状态），内皮细胞可感受力的状态，从而促使合成舒张血管的NO前列腺素等物质[1]。经过大量研究，人们公认这些能感受机械力的细胞表面有能够介导胞外钙离子内流的trp家族离子通道，这些钙离子通道介导了机械刺激时胞质内钙离子的升高。但是，需要进一步研究trp家族感受机械力的具体机制。 　　研究表明，用含有RGD的磁珠处理细胞，再加磁场，使磁力作用于整合素上，发现力作用于整合素上时细胞膜显示出了很大的刚性，即抵抗形变，同时细胞核的形状发生了改变；相对的，用磁珠偶联抗原肽，再加磁场，使力作用于MHC时，细胞膜显示出了柔性，而且细胞核的形状未发生改变。他们认为机械力通过整合素，传给了在胞内与整合素相连的细胞骨架，再由细胞骨架传递给细胞核，从而引起细胞核形状变化以及调控基因的表达。而MHC由于没有与细胞骨架相连，故受力时细胞膜显示出了柔性。同时，机械力刺激胞外基质ECM，产生与直接力刺激整合素相同的效果。这些研究阐明了机械力传导的一种基本模式，即： 　　机械力刺激――ECM――整合素――细胞骨架――调控生理状态 　　另外一些研究显示，用机械力刺激间充质干细胞（刺激方式为使用光镊为偶联在整合素上的小珠施加力），会引起细胞质内钙离子的明显升高。胞质升高的钙离子有两个来源，一个是从胞外流入的，一个是从胞内的内质网流出而进入细胞质的（在胞外无钙的环境中，向细胞处理内质网上的钙离子通道抑制剂，发现对机械力刺激不会引起胞质钙离子上升）。该研究组发现位于细胞膜上的介导胞外钙离子流入胞质的是trp家族离子通道trpm7。他们研究了细胞骨架扮演的作用：在无IP3时，在胞外无钙环境中，用细胞骨架解聚剂处理，发现内质网无法释放钙离子到胞质；而抑制内质网钙通道，在胞外有钙环境中，解聚细胞骨架，发现胞外钙离子也无法流入