好氧反硝化细菌LKX―1的分离、鉴定及初步应用研究.docVIP

好氧反硝化细菌LKX―1的分离、鉴定及初步应用研究 　　摘要：为筛选分离好氧反硝化细菌菌株用于农村生活污水处理，从水稻田中分离高效好氧反硝化细菌菌株，并进行鉴定及除氮效果分析。结果表明，通过菌体、菌落形态特征和生理生化指标并结合16S rDNA序列分析将该菌株鉴定为蒙氏假单胞菌（Pseudomonas monteilii）；农村生活污水除氮条件初步研究结果表明，在葡萄糖添加量0.03%、接种量0.00015%、摇床转速120 r/min和发酵处理时间48 h条件下，总氮和亚硝酸盐氮去除率分别达到91.55%和96.33%。 　　关键词：好氧反硝化细菌；分离；农村生活污水；除氮率 　　中图分类号：S154.3 文献标识号：A 文章编号：1001-4942（2016）11-0076-05 　　Abstract A high efficient aerobic denitrifier was isolated from rice field to dispose the rural domestic sewage， then the strain was identified and its nitrogen removal effect was analyzed. The results showed that the strain was identified as Pseudomonas monteilii through analyzing the cell morphology， colony morphology， physiological and biochemical characteristics combined with 16S rDNA sequence. The preliminary study on nitrogen removal conditions of rural domestic sewage showed that with the glucose additive amount of 0.03%， inoculation amount of 0.00015%， rotation speed of 120 r/min and cultural time of 48 hours， the removal rate of TN and NO-2-N reached 91.55% and 96.33% respectively. 　　Keywords Aerobic denitrifier； Isolation； Rural domestic sewage； Nitrogen removal rate 　　随着我国农村生活水平的大幅度提高，农村生活污水中的COD、TN含量增加。据统计，我国农村生活污水每年的排放量为80～90亿吨[1]。由于农村生活污水具有面广分散、成分不稳定、排放不均匀、几乎不含有毒有害有机污染物、水量系数变化大等特点，加上我国大部分农村没有污水排放管网和污水处理系统，这些生活污水未经任何处理就直接排放到自然环境中，使得农村河道、地下水水体污染越来越严重，对生态环境造成了极大破坏。我国农村生活污水处理技术的研究起步较国外晚，目前国内较为成熟的处理技术主要有稳定塘处理技术[2]、人工湿地处理系统[3]、土地处理技术[4]和生物膜技术[5，6]等。尽管这些污水处理技术在实际应用中取得了一定效果，但也存在投资和处理成本较高、工艺复杂、占地面积大以及处理效果不稳定等缺点。因此，研究一种适合农村生活污水处理的技术，对解决农村污染问题具有迫切的现实意义。目前利用好氧反硝化菌来处理污水中氮素正得到广泛关注和研究。本研究试图通过筛选具有反硝化作用的目标菌，开展对农村生活污水的除氮研究，以期为好氧反硝化细菌在农村生活污水处理中的应用提供理论支持与实践指导。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　1.1.1 样品来源 本试验反硝化菌株筛选所用土壤来自湖南农业大学周边水稻田，当天采集当天分离。 　　农村生活污水：取自长沙市某小区生活污水。 　　1.1.2 培养基 反硝化细菌富集、分离培养基：参照文献[7]配制。 　　斜面培养基：牛肉膏蛋白胨培养基。 　　液体种子培养基：葡萄糖3%，蛋白胨1%，牛肉膏0.5%，NH4NO3 0.5%，KH2PO4 0.2%，MgSO4?7H2O 0.1%，pH 7.0～7.5。 　　反硝化性能测定培养基（g/L）：参照文献[7]配制。 　　发酵基础培养基：葡萄糖2%，蛋白胨1%，KH2PO4 0.2%，MgSO4?7H2O 0.1%，pH 7.0～7.5。 　　以上培养基均在121℃灭菌25 min。 　　1.1.3