微波辅助酶法提取白花蛇舌草总黄酮的工艺研究.docVIP

微波辅助酶法提取白花蛇舌草总黄酮的工艺研究 　　摘要：为优化微波辅助酶法提取白花蛇舌草（Hedyotis diffusa）总黄酮工艺，在单因素试验基础上，应用中心组合设计，采用二次多项式逐步回归分析方法对提取工艺条件进行了优化，确定微波辅助酶法提取白花蛇舌草总黄酮工艺最佳条件为酶解时间1.5 h、酶解温度45 ℃、酶用量1.4%、pH 5.5，按此工艺条件进行验证，白花蛇舌草总黄酮提取率可达4.42%。 　　关键词：白花蛇舌草（Hedyotis diffusa）；总黄酮；微波辅助；酶法 　　中图分类号：S567.21+9；R284.2 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2016）14-3708-04 　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.14.042 　　Abstract：Microwave-assisted enzymetic extraction of total flavonoids in Hedyotis diffusa Willd. was studied by using single factor experiment and central composite design combining quadratic polynomial stepwise regression analysis. It was concluded that the optimal conditions of extraction were： enzymolysis time 1.5 h，enzymolysis temperature 45 ℃，enzyme dosage 1.4% and pH 5.5. Under these conditions， the yield of total flavonoids in Hedyotis diffusa Willd was up to 4.42%. 　　Key words： Hedyotis diffusa； total flavonoids； microwave-assisted； enzymetic method 　　白花蛇舌草为茜草科植物白花蛇舌草（Hedyotis diffusa）的干燥全草，广泛分布于中国东南和西南各省，具有清热解毒、消痛散结、利湿除湿之功效，尤善治疗各种类型炎症，是民间常用中草药[1]。白花蛇舌草中含大量生物活性物质，如黄酮类、有机酸及其酯类、蒽醌类、萜类等成分[2]，其中黄酮类是其主要的药效成分，具有抗菌抗炎、增强免疫系统、抗肿瘤、抗化学诱变等作用[3，4]，并在临床上得到了广泛应用[5，6]。据文献报道，白花蛇舌草中黄酮类化合物的提取方法主要有微波辅助法[7，8]、超声提取法[9]及醇提热回流法[10]等，关于用微波辅助联合酶法提取白花蛇舌草总黄酮的方法尚未见报道。本研究在单因素试验基础上，使用响应面分析法优化白花蛇舌草总黄酮的提取工艺，为白花蛇舌草总黄酮的进一步开发研究奠定基础。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料、试剂与仪器 　　白花蛇舌草药材购自赣州市丁氏草药店，经赣南医学院药学院中药鉴定教研室程齐来教授鉴定。 　　芦丁标准品（含量≥98%，天津一方科技有限公司）；纤维素酶（3×104 μ/g，江苏淮安百麦绿色生物能源有限公司）；无水乙醇、石油醚、盐酸、亚硝酸钠、硝酸铝均为分析纯。 　　UV-6100PCS型紫外可见分光光度计（上海美谱达仪器有限公司）；SHA-C型水浴恒温振荡器（金坛市白塔新宝仪器厂）；HH-2型数显恒温水浴锅（金坛市城东新瑞仪器厂）；WF-4000型微波快速反应系统（上海屹尧分析仪器有限公司）；FW135型手提中药粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）；FA1104型分析天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；RE-52AA型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；SHZ-D（Ⅲ）型循环水式真空泵（巩义市予华仪器有限责任公司）；202A-2型电热干燥箱（上海阳光试验仪器有限公司）；KQ3200DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。 　　1.2 方法 　　1.2.1 标准曲线的绘制 精密称取13.50 mg芦丁标准品，用现配的60%乙醇溶解，定容于100 mL容量瓶中，摇匀，得135.0 mg/L的芦丁标准储备溶液。再精密量取芦丁标准储备液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，分别置于10.0 mL容量瓶中。依次分别加60%乙醇稀释至5.0 mL，加入5%亚硝酸钠溶液0.3 mL，摇匀，静置5 min，再加入0.3 mL的10%硝酸铝溶液，迅速摇匀，静置6 min，最后加入4 mL 4%氢氧化钠溶液，混匀，均用乙醇稀释至刻