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实验二 SSH法定量测定还原糖   Exp.2 Quantitative Determination  of Reducing Sugar with Somogyl-Shaffer-Hartmann Reagent 一.实验原理 还原糖溶液可使铜离子（Cu2+）还原成亚铜离子（Cu+），后者又被过量的碘氧化，用标准硫代硫酸钠溶液滴定剩余的碘，即可算出还原糖的量。 反应过程如下： 还原糖存在时,试剂中Cu2+被还原成Cu+ CuSO4+NaOH→Cu(OH)2+Na2SO4 OH HO-CH-COONa OCHCOONa Cu + →2H2O + Cu OH HO-CH-COOK OCHCOOK OCHCOONa R + 2Cu Cu2O+RCOOH OCHCOOK HO-CH-COONa +2 OH-C-COOK 当硫酸加到一定量的SSH试剂中，即有游离碘析出： 5KI+KIO3+3H2SO4 →3K2SO4+3H2O+3I2 氧化亚铜可被析出的游离碘氧化而溶解： 2Cu++I2 → 2Cu2++2I－ 剩余的碘可用硫代硫酸钠溶液滴定： I2+2Na2S2O3 →Na2S4O6+NaI 还原糖越多，产生的氧化亚铜越多，耗去的碘也越多。当溶液中碘酸钾量一定时，还原糖越多，碘的剩余量越少。用硫代硫酸钠滴定剩余的碘，可以间接计算出还原糖的含量。 二.实验用品 1.材料 葡萄糖未知液（每5毫升勿超过2毫克） 2.试剂 （1）Somogyl-Shaffer-Hartmann三氏试剂 取晶体CuSO4 5g ，酒石酸7.5g，无水碳酸钠40g，碘化钾10g，碘酸钾0.7g及草酸钾18.4g溶于水中，并稀释至1000ml。 （2）1N硫酸液 （3）1%淀粉液 取可溶性淀粉1g，加蒸馏水10ml，搅匀，徐徐倾入约50ml沸水中，搅拌均匀后，冷却，最后用蒸馏水稀释至100ml。 （4）0. 005N硫代硫酸钠的标准液 称取纯硫代硫酸钠25g，溶于已煮沸过的冷蒸馏水中，并稀释至1000ml，此液的浓度约为0.1N，其准确度必须校正。 三.方法和步骤 1.取100ml锥形瓶两个,标明“测定”及“空白”号。 2.于“测定”瓶内准确加入待测葡萄糖未知液5ml,于“空白”瓶内加蒸馏水5ml 。 3.于两瓶内准确加入SSH三氏试剂5ml,于瓶口插入一个小漏斗,在沸水浴中加热15min 。 4.小心将两瓶取出(切勿摇动),冷却后,各加1mol/L H2SO4约5ml,摇荡至无气泡发生为止。 5.用0.01mol/L Na2S2O3标准液分别滴定两瓶内剩余的游离碘,至棕色将近消失时,加1%淀粉液4滴,再继续滴至蓝色刚消失为止,记下两瓶的滴定毫升数。 四.实验结果 根据0.01mol/L Na2S2O3液1ml相当于一价铜（Cu+）0.636mg,因此,空白液于测定液的Na2S2O3滴定毫升数之差×0.636,即相当于5ml溶液中的还原糖所能将Cu2+还原成Cu+的毫克数 查表可得出相应葡萄糖毫克数 五.思考题 六.参考文献 现代生物学基础实验指导,