【大学课件】西南民族大学：兽医微生物学（实验课件）.pptVIP

2. 细菌形态结构的观察： （1）准备：安置显微镜?调节光源?调节双 筒目镜间距?调节聚光器数值孔径值。 （2）观察：将香柏油一滴滴于标本片有颜色的观察区，并置于载物台上，用片夹固定好，用推进器将观察区置于物镜正下方，依次用高倍镜?油镜观察。包括大肠杆菌、葡萄球菌的形态及炭疽芽孢、巴氏杆菌荚膜和大肠杆菌的鞭毛等细菌的特殊结构。 革兰氏染色法的基本步骤 先用初染剂结晶紫进行，所有细菌都被染成初染剂的蓝紫色；再用碘液媒染，它能与结晶紫结合成结晶紫-碘的复合物，从而增强了染料与细菌的结合力；然后用乙醇脱色，最后用复染剂（如番红复染） 。 4．染色： （1）结晶紫初染1-2min，水洗； （2）碘液媒染1min，水洗； （3）95%乙醇脱色至无紫色为止，立即水洗； （4）石炭酸复红复染2min，水洗。 5．镜检：吸水纸吸干水分，干燥后，用油镜观察。 G+为蓝紫色，G-菌为红色 器材与试剂 三角瓶、烧杯、量筒、玻棒、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、酸度计、棉塞、记号笔、麻绳等。 牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L NaOH、 1mol/L HCl 实验步骤: 1、划线：在酒精灯火焰旁无菌挑取一环土壤悬液，在平板上划线，划线完毕后，将培养皿倒置于37℃培养箱中培养24-48h。 2、细菌培养性状的观察 3、纯培养：长出单个菌落后，结合形态学检查，从中挑取可疑菌落接种至斜面，待菌苔长出后，染色观察是否为单一微生物。若不纯， 需重复上述纯 化过程，直到得 到纯培养物。 2、结果观察： （1）吲哚试验：于培养2d后的蛋白胨水培养其内加3-4滴乙醚，摇动数次，静置1-3分，待乙醚上升后沿试管壁徐徐加入2滴吲哚试剂，在乙醚和培养物之间产生红色环状物为阳性反应。 实验步骤: 1、用无菌棉拭子沾取小量待测菌液，均匀涂布 平板，待稍干后， 用无菌眼科镊将各种药敏 片分别平贴在平板培养基表面，每板4-6个， 相互间应有一定距离（15mm）。 2、置37℃ ，培养8-12h，观察结果。 3、结果判定：观察有无抑菌圈 及测量其直径，按下表判定 对药物的敏感性。 实验步骤: 1．编号：取无菌平皿9套，分别标明10-4、10-5、 10-6（稀释度）各3套。别取6支盛有4.5ml无菌水 的试管，依次标明10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、 10-6……，稀释度的选择应根据样本中细菌的估计值 确定。 稀释：用1ml无菌吸管取0.5ml待测样本至10-1 ， 此即为10倍稀释，混匀，另取一支1ml无菌吸管， 从10-1试管中吸取0.5ml加入10-2 管中，即为100倍 稀释……,其余依次类推，最终稀释度为10n倍。 将培养后菌落计数的结果填入下表： 器材及试剂 培养基：乳糖蛋白胨培养基（内有倒置小套管）； 三倍浓缩； 糖蛋白胨管（内有倒置小套管）； 伊红美蓝平板；灭菌水等； 载玻片、灭菌吸管、灭菌试管等。 4. 复发酵试验：经镜检为G-无芽孢杆菌的菌落，重新接种普通浓度的乳糖蛋白胨发酵管中，37℃ 培养24小时，若产酸产气，即证实有大肠菌群存在。 5. 检索：根据初发酵试验的阳性管（瓶）数查“大肠菌群检数表”，即得大肠菌群可能数（MPN）。 实验步骤: 1 .准备鸡胚：接种前用检卵灯观察是否为受精卵 及其活力。 2 接种（绒毛尿囊腔途经）： （1）在检卵灯下，用铅笔勾出气室及胚胎的 位置，并在尿囊膜血管较少的地方作记号。 （2）消毒：用碘酒消毒气室蛋壳，酒精脱碘， 用灭菌钢针在记号处打一孔。 （3）接种病毒：用18mm针头的1ml注射器吸 取鸡新城疫病毒，针头通过打出的孔进针，刺入尿囊腔，注入0.1ml。 （4）用融化的石蜡封闭小孔，39℃孵化器中 孵化72h。 （一）血凝试验（HA）：取96孔板，按以下步 骤操作： 1、第一排1-12孔各加生理盐水50ul，第二排1-12 孔加生理盐水50ul为红细胞对照； 2、吸50ul病毒液于第一排第1孔，混匀后取50ul 至第2孔，依次稀释至第12孔，弃去50ul，各 孔经倍比稀释后稀释度依次为2-1~2-12 。 3、第一排1-12孔及第二排1-12孔各加1%鸡红细 胞50ul，微型震荡器震荡2min混匀。 4、室温静置10-30分，观察结果。 5、结果判定：红细胞对照组红细胞完全沉降，以试验排中能使等量红细胞发生完全凝集的病毒最高稀释倍数，作为病毒的血凝价，即HI效