12-分子生物学研究方法幻灯片.pptVIP

第十二章 分子生物学研究方法 SNP概述 单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)：单个核苷酸的突变而引起的多态性。 单体型(Haplotype)：染色体上某一区域的一组相关联的SNP等位位点被称作单体型。相邻SNPs的等位位点倾向于以一个整体信息传递给后代。 SNP分类： 基因编码区SNP(cSNP)： 同义cSNP：SNP导致的编码序列改变并不影响蛋白质的氨基酸序列，突变碱基和未突变碱基含义相同。 非同义cSNP：碱基改变使蛋白质序列发生变化，从而影响蛋白质的功能。常是生物性状发生改变的直接原因。 基因调控区SNP(pSNP)：影响基因表达量的多少。 基因间随机非编码区(rSNP)： cSNP、pSNP在功能和疾病发生、发展方面具有更重要的意义。 SNP检测技术 基因芯片、Taqman技术、分子信标、焦磷酸测序。 Taqman技术原理： 探针设计上，利用荧光共振能量转换(FRET)技术，探针5和3端分别用特殊的染料标记，称为供体-受体染料对或引爆-猝灭染料对。 正常情况下，由于探针5端荧光基团和3端猝灭基团紧邻在一起，供体所发荧光由于其光谱在空间上接近受体染料而被猝灭，只有当两者分离时才能检测到供体所发出的荧光。 Taqman技术的基本原理是利用Taq酶的5核酸外切酶活性，PCR反应中除了两个传统的PCR引物P1、P2外，还有第三