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碱浸提法提取脱脂火棘籽粕蛋白质工艺研究 　　摘要 以脱脂火棘籽为原料，在测定火棘籽蛋白等电点的基础上，用碱提酸沉法设计火棘籽蛋白的提取工艺，运用单因素试验和正交试验确定工艺参数，结果表明：最佳提取工艺参数为料液比1：12，碱提pH值10，碱提时间100 min，碱提温度50 ℃，在此条件下火棘籽粗蛋白得率10.95%。 　　关键词 火棘籽粕；蛋白质；提取工艺；碱浸提法 　　中图分类号 TS255 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2016）08-0275-02 　　Abstract Taking seed of P.fortuneana as raw material，process parameters were determined by single factor experiment and orthogonal test at the basis of isoelectry of the protein.The results showed that the optimal process were as follows：the ratio of material to solvent was 1：12，pH value in alkali extraction was 10，and time was 100 min，at 50 ℃.Yield came to 10.95% under this condition. 　　Key words seed of P.fortuneana；protein；extraction process；alkali extraction adopted 　　火棘（P.fortuneana），又名火把果、赤阳子等，为蔷薇科火棘属常绿野生灌木果树。我国火棘资源极为丰富，且分布集中，我国东南、西南和西北部[1]，如贵州和四川大巴地区每年鲜果产量均在2.5万t以上[2]，湖北省鄂西南及神农架年均产果近5万t[3]。火棘不仅具有较高的观赏价值，其果实还具有很好的食用和药用保健价值，火棘果代粮食用在我国已有1 700多年的历史[4]，也是一种重要的天然色素、果胶及饲料资源[5]。该文就碱提酸沉法从脱脂火棘籽粕中提取蛋白质进行研究，确定提取脱脂火棘籽粕蛋白的工艺参数，以期为工业生产提供相应工艺参数。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　1.1.1 试验仪器。HH-2型数显恒温水浴箱（北京医疗设备厂）；LD4-2A型低速离心机（北京医用离心机厂）；GZX-9146MBF电热恒温鼓风干燥箱（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）；PHS-3D精密pH计（上海市安艇有限公司）；TMP-2上皿式电子天平（湘仪天平仪器设备有限公司）。 　　1.1.2 试验材料与试剂。脱脂火棘籽粕（湘西），硫酸钾（分析纯），氢氧化钠（分析纯），0.01ml/L盐酸溶液，浓硫酸（分析纯），2%硼酸，10%硫酸铜溶液，混合指示剂（1份0.1%甲基红乙醇溶液与5份0.1%溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合）等。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 蛋白质含量的测定。采用微量凯氏定氮法测定。称取均匀样品置于凯氏烧瓶内，消化，蒸馏，加入指示剂，用 0.01mL/L盐酸溶液滴定吸收液，滴至溶液出现浅紫红色为止。然后吸收空白消化液，按上述操作步骤，做空白试验。重复3次。 　　1.2.2 蛋白质提取工艺流程。脱脂油粕→过筛（50目）→浸提→离心→上清液→调蛋白质等电点→离心→取下层沉淀→抽滤→鼓风干燥→产品。 　　1.2.3 工艺条件优化。采用单因素试验，分别探讨碱浸提液pH值、浸提温度、提取时间、料液比对脱脂火棘籽粕蛋白提取效果的影响。采用正交试验L9（34），以碱浸提液pH值、浸提温度、浸提时间、料液比为变量因素，以提取率为评价指标，得出提取脱脂火棘籽粕蛋白最佳工艺条件。 　　1.2.4 蛋白质提取率的计算。蛋白质提取率（%）=（提取火棘籽蛋白质量/火棘籽原蛋白质量）×100 　　2 结果与分析 　　2.1 脱脂火棘籽粕原蛋白含量测定结果 　　根据统计，3次测定脱脂火棘籽粕粗蛋白含量分别为14.62%、14.60%、14.55%，平均值为14.59%。 　　2.2 脱脂火棘籽粕蛋白质等电点确定 　　分别称取20 g脱脂火棘籽粕按1∶12固液比，温度40 ℃，加碱液调节pH值至10.0浸提100 min，然后离心15 min（3 000 r/min），取上清液，分别调pH值至2.9、3.2、3.5、3.8、4.1，离心15 min（3 000 r/min），取沉淀干燥后分别称重，结果如表1所示。可以看出，当pH值在2.9～3.5范围内时，火棘籽蛋白含量逐渐增大，最大可达0.272