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野薄荷组织培养脱病毒技术研究 　　摘要 [目的]采用热处理结合茎尖分生组织培养的方法，研究薄荷组培脱毒技术。[方法] 以薄荷组培苗为试材，在高温热处理不同天数后剥取茎尖，进行薄荷花叶病毒脱毒技术研究，同时采用RT-PCR法检测其脱毒效果。[结果]适合薄荷热处理时间为20～45 d，试管苗的成活率可达66.7%～90.0%；32～38 ℃热处理35～45 d剥取0.3～0.5 mm的茎尖进行培养，脱毒率为100.0%。[结论] 热处理结合茎尖培养是一种脱除薄荷病毒的有效途径。 　　关键词 薄荷；组织培养；热处理；脱毒；RT-PCR 　　中图分类号 S567.23+5 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2016）06-0061-02 　　Study on Virus-free Technique of Mentha haplocalyx by Tissue Culture 　　XIE Wen-shen 1 FU Yan-kun 2 ZHOU Lu 1 ZHANG Qing-hua 3 　　（1 Spice Research Institute of Yunnan Agricultural University，Kunming Yunnan 650051； 2 Kunming University； 3 College of Horticulture and Landscape of Yunnan Agricultural University） 　　Abstract [Objective] The technique of virus-free in Mentha haplocalyx was studied by combing tissue of shoot-tip with heating treatment.[Method] Mentha haplocalyx in vitro was used as test material in this experiment to eliminate by combing tissue of shoot-tip with heat therapy，and detected by indirect RT-PCR method.[Result] The suitable time for heat treatment was 20～45 days，the survival rate of tissue culture seedling was up to 66.7%～90.0%；0.3～0.5 mm shoot-tip with heat treatment by 32～38 ℃ for 35～45 days of Mentha haplocalyx were 100.0% free from CMV and TMV.[Conclusion] Combing tissue of shoot-tip with heating treatment is an efficient way of virus-free in Mentha haplocalyx. 　　Key words Mentha haplocalyx；tissue culture；heat treatment；virus-free；RT-PCR 　　薄荷（Mentha haplocalyx Briq），唇形科薄荷属多年草本。性凉味辛，以全草入药；具有清利头目、透疹功能，用于治疗风温初起[1-5]、风热感冒、头痛、麻疹、喉痹、风疹、目赤等症。薄荷是世界三大香料之一[4]，在国际市场上，薄荷主要作为食品、化妆品的添加剂，用来增加气味、改善口味等。现阶段，薄荷的市场需求量巨大。但薄荷在生长过程中，由于品种更新缓慢、易感毒、优良性状退化等原因，导致薄荷的产量和经济效益都大大降低[1，5-6]。薄荷的主要病毒是黄瓜花叶病毒（CMV）和烟草花叶病（TMV）[7]。 　　热处理主要是利用病毒和寄主植物对高温忍耐性的差异，当植物组织处于高于正常温度的适当高温环境时[1-5]，可部分或完全钝化植物组织中的病毒，但寄主植物组织很少或不会受到伤害。在马铃薯、草莓和葡萄的脱毒研究[8-13]中，热处理结合茎尖培养法的应用最多；而在观赏植物上，热处理在百合、大丽花和罗汉果的脱毒研究[14-19]中也有应用，脱毒效果均很好。尚未见该法应用于薄荷脱毒的研究报道。本文以感病野生薄荷为材料，采用“热处理+茎尖培养”的脱毒方法，培养脱毒薄荷组培苗的培养技术。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　田间选取表现花叶症状的野薄荷品种[1]，采用RT-PCR测定法，检测烟草花叶病毒（TMV）及黄瓜花叶病毒（CMV