DNA的复制-2课件.pptVIP

基因突变 遗传物质的结构改变而引起的遗传信息改变，均可称为突变。 从分子水平来看，突变就是DNA分子上碱基的改变。 在复制过程中发生的DNA突变称为DNA损伤(DNA damage)。 突变是进化、分化的分子基础 突变导致基因型改变 突变导致死亡 突变是某些疾病的发病基础 突变的概念和类型 突变(mutation)——在基因组的某一特定区域核苷酸序列发生改变而引起的基因型稳定的可遗传的永久性的改变 突变体(mutant)——基因发生突变的生物体 野生型：未发生基因突变的个体 突变的类型 · 按DNA序列的改变可分为： 点突变(point mutation):一个碱基对发生了改变 · 单点突变 · 多点突变 · 转换：不同嘌呤或嘧啶之间的转换 · 颠换：嘌呤换为嘧啶，嘧啶换为嘌呤 碱基插入或碱基缺失：较长碱基序列的增加或缺失 按突变的结果可分为： 同义突变：没有改变产物氨基酸序列的密码子，不会导致产物的氨基酸组成改变 错义突变：改变了产物氨基酸的组成 无义突变：碱基的改变使某种氨基酸的密码子变成了终止密码，使肽链合成提早终止 按突变效应是背离或返回野生型可分为： 正向突变：改变了野生型性状的突变 回复突变：突变体所失去的野生型性状可以通过第二次突变得到恢复，则第二次突变称为回复突变 突变产生的原因 自然发生： DNA复制错误 碱基互变异构体的存在 自发的脱嘌呤、脱氨基作用 氧化作用损伤碱基 转座子的作用 等等 诱发突变： 物理因素——放射线，包括紫外线、X射线、γ射线等 化学因素——碱基类似物、碱基修饰剂、DNA插入剂等 生物因素——病毒、细菌等 基因的人工诱变 化学方法：使用化学诱变剂.如亚硝酸,硫酸二乙酯等. 物理方法：如X射线,γ射线,紫外线,激光等. 可用于人工诱变育种、基因工程、转基因动物等 突变的分析检验 在人群中，各个体基因的核苷酸序列会存在一定差异，称为基因多态性。 特定的多态性片段与某些特殊的生理现象紧密联系，如疾病等，这一多态性片段称为“遗传标记” 。 基因多态性是个体的“身份证”；有的虽然不表现疾病，但也许会影响对药物的反应和用药效果。 基因多态性分析技术广泛应用于群体遗传学研究、疾病连锁分析和关联分析、疾病遗传机制研究、肿瘤易感性研究、个性化用药等诸多方面。 遗传标记分析： 第一代：限制性酶切片段多态性(restriction fragment length polymorphism, RFLP)，单个碱基的缺失、重复及插入引起了限制性内切酶位点的变化，导致DNA片段长度的变化。 第二代：DNA重复序列的多态性，特别是短串联重复序列，如小卫星DNA和微卫星DNA，并主要表现于重复序列拷贝数的变异。 第三代：单核苷酸多态性分析(single nucleotide polymorphism, SNP)，散在的单个碱基的不同，包括单个碱基的缺失和插入，但更多的是单个碱基的置换，是目前最受关注的多态性分析。 限制片段长度多态性分析 是发展最早的DNA标记技术。 由于限制性酶切位点上碱基的插入、缺失、重排或点突变所引起的基因型之间限制性片段长度的差异， 广泛用于基因组遗传图谱构建、基因定位以及生物的进化和分类关系研究。 基本操作步骤：DNA提取→用限制性内切酶酶切DNA→用凝胶电泳分开DNA片段→把DNA片段转移到滤膜上→利用放射性标记的探针杂交显示特定的DNA片段（Southern杂交）→结果分析。 ·单链构象多态性分析 相同长度的单链DNA因核苷酸序列的差异，甚至单个碱基不同，而产生的构像变异，在非变性聚丙烯酰胺中表现为电泳迁移率的差别。 PCR-SSCP法——在疑有突变的DNA片段附近设计一对引物进行PCR扩增，PCR产物变性处理，双链DNA分开成单链，再用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，根据条带位置变化来判断目的片段中是否存在突变。 SSCP分析对DNA序列的改变非常敏感，常常一个碱基差别都能显示出来。SSCP结果判定是通过多个样品之间对比，观察条带之间位置改变，从而显示出不同生物个体的DNA特异性，达到指纹分析的目的。 该技术已被广泛用于癌基因和抗癌基因变异的检测、遗传病的致病基因分析以及基因诊断、基因制图等领域。 PCR的基本原理 SNP 分析技术按其研究对象主要分为两大类： 对未知SNP 进行分析,即找寻未知的SNP 或确定某一未知SNP 与某遗传病的关系。多种方法可以使用，如温度梯度凝胶电泳( TGGE) 、变性梯度凝胶电泳(DGGE) 、单链构象多态性(SSCP) 、限制性片段长度多态性(RFL P)