28天重复经口毒性试验.PDFVIP

28 天重复经口毒性试验 Repeated Dose 28-Day Oral Toxicity Study （征求意见稿） 1 范围 本规范规定了啮齿类动物28 天重复经口毒性试验的基本原则和方法。 本规范适用于检测受试物的短期毒性作用。 2 规范性引用文件 OECD Guidelines for the Testing of Chemicals （No. 407, Oct. 2008 ） 食品安全国家标准 28 天经口毒性试验GB 15193.22-2014 3 试验目的 通过本试验确定28 天经口连续接触受试物引起的毒性效应，了解受试物作 用靶器官和剂量-反应关系，并估计受试物的未观察到有害作用剂量，初步评价 受试物经口的安全性，并为亚慢性及慢性经口毒性试验的剂量、观察指标、毒性 终点的选择提供参考信息。 4 定义 4.1 未观察到有害作用剂量 （NOAEL，No-observed adverse effect level ） 是指通过动物试验，以现有的技术手段和检测指标未观察到任何与受试物有 关的毒性作用的最大剂量。 4.2 卫星组 本试验方法中是指对照组和最高剂量组的部分动物，在染毒结束后仍继续观 察至少14 天，用于了解受试物毒性作用的持续性、可逆性和迟发性。 5 试验基本原则 受试物以不同染毒剂量每日经口给予各组实验动物，每组采用一个染毒剂 量，连续染毒28 天。染毒期间每日观察动物的毒性反应，死亡或濒死动物尽可 能进行大体解剖、血液生化指标检测及组织病理学检查。染毒结束后所有存活动 物实施安乐死后进行大体解剖。部分实验动物的组织器官进行组织病理学检查。 6 试验方法 6.1 剂量设计 至少设定3 个受试物剂量组和1 个对照组，除不接触受试物外，对照组的其 余处理均与受试物剂量组相同。最高剂量应能引起动物毒性反应，而不引起动物 死亡或严重毒性反应；最低剂量应不出现任何可观察到的毒性效应，能找出 NOAEL ，若有人群接触水平的资料，则最低剂量应高于人群实际接触水平；中 剂量介于高、低剂量之间，可出现轻度的毒性效应，若设多个中间剂量，则各染 毒剂量应引起不同程度的毒性作用。 如果有资料表明，受试物接触水平超过 1000mg/kgBW/d 时不会产生可观察 到的毒性作用，而且可以根据相关结构化合物预期受试物毒性时，可以考虑不必 进行三个剂量水平的试验。 6.2 受试物制备 当受试物需使用溶媒配制成溶液或混悬液时，溶媒首选水，其次为植物油（如 橄榄油、玉米油等），不溶于水或油的受试物亦可使用羧甲基纤维素、淀粉等配 成混悬液。如果使用其他溶媒时，必须先了解其毒性特点。 受试物配制物需测定稳定性。 6.3 实验动物 6.3.1 动物选择 实验动物应符合国家标准相应规定。选择已有资料证明对受试物敏感的物种 和品系，啮齿类动物通常首选年轻的成年大鼠（一般选用 6～8 周龄，不超过 9 周龄），动物初始体重差异应不超过同一性别平均体重的20% 。如果长期毒性试 验的剂量设计需要参考该试验的剂量设计，则两个试验应选用相同种系和来源的 实验动物。 每组实验动物至少20 只（雌雄各半），如果试验中期计划剖检动物，则应相 应增加每组动物数量。另外，对照组和最高剂量组均应设定一个卫星组 （每组 10 只，雌雄各半），在染毒结束后继续观察至少 14 天，用于了解受试物毒性作 用的持续性、可逆性和迟发性。 6.3.2 饲养环境 实验动物饲养环境均应符合国家标准相应规定。选用常规饲料，自由饮水。 动物按组别、性别分笼饲养，每笼动物数量应满足动物最低需要的空间，不影响 动物自由活动和观察动物的体征为宜。 6.4 试验步骤 染毒开始前，实验动物需适应实验环境至少 5d 。实验动物随机分组。受试 物可通过灌胃、掺入饲料或饮水进行染毒，具体的方法应当根据受试物的物理、 化学特性及其毒代动力学试验结果而定。每周染毒7d，连续染毒28 天。试验期 间所有动物染毒的方式应完全相同。 6.4.1 灌胃 灌胃体积一般不超过 10ml/kgBW，且各组染毒体积相同，每日在大致相同 时间段灌胃，每周称体重2 次，根据体重调整灌胃体积。如为水溶性的受试物最 大灌胃体积可达到20ml/kgBW 。油性液体灌胃体积应不超过4ml/kgBW 。当受