小花玄参中总皂的苷定性定量分析.docVIP

小花玄参中总皂苷的定性定量分析 摘要：采用化学试剂法和分光光度法对小花玄参（ｓｃｒｏｐｈｕｌａｒｉａ ｓｏｕｌｉｅｉ ｆｒａｎｃｈ．）中总皂苷成分进行定性、定量分析。以菝葜皂苷元为对照品，于３１１ ｎｍ处比色测定，测得小花玄参中总皂苷含量为１１．０５ ｍｇ／ｇ，平均回收率为９７．５％，ｒｓｄ为１．５９％（ｎ＝６），该测定方法简便、准确，稳定性、重现性好。 关键词：小花玄参（ｓｃｒｏｐｈｕｌａｒｉａ ｓｏｕｌｉｅｉ ｆｒａｎｃｈ．）；总皂苷；定性分析；定量分析 ａｂｓｔｒａｃｔ： ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ ａｎｄ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｓａｐｏｎｉｎｓ ｉｎ ｓｃｒｏｐｈｕｌａｒｉａ ｓｏｕｌｉｅｉ ｆｒａｎｃｈ. was conducted ｂｙ ｍｅａｎｓ ｏｆ ｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ. according to a311 nm of sample tested using ｓａｒｓａｓａｐｏｇｅｎｉｎ ａｓ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ． ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｓａｐｏｎｉｎｓ ｗａｓ １１．０５ ｍｇ／ｇ ｉｎ ｓｃｒｏｐｈｕｌａｒｉａ ｓｏｕｌｉｅｉ ｆｒａｎｃｈ.. tｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｒａｔｅ ｗａｓ ９７．５％； ａｎｄ ｒｓｄ ｗａｓ １．５９％ （ｎ＝６）． ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄｓ ｗｅｒｅ ｓｉｍｐｌｅ ａｎｄ ａｃｃｕｒａｔｅ， ｗｉｔｈ ｅｘｃｅｌｌｅｎｔ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｔｙ． ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｓｃｒｏｐｈｕｌａｒｉａ ｓｏｕｌｉｅｉ ｆｒａｎｃｈ； ｔｏｔａｌ ｓａｐｏｎｉｎｓ； ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ； ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ 小花玄参（ｓｃｒｏｐｈｕｌａｒｉａ ｓｏｕｌｉｅｉ ｆｒａｎｃｈ．）属玄参科（ｓｃｒｏｐｈｕｌａｒｉａｃｅａｅ）玄参属细弱小草本，为我国特有种，产于四川西部、青海东部和甘肃东南部。玄参科植物中含有皂苷类成分，主要为甾体皂苷，由此推测小花玄参中含有甾体皂苷。皂苷具有多种药理学功能，如抗炎、抗肿瘤等［１］。因此，有必要对小花玄参中的皂苷进行研究。本研究通过化学试剂法和分光光度法对小花玄参中总皂苷成分［３］进行定性［２］和定量测定，为总皂苷的快速定性定量分析提供参考。 １ 材料与方法 １．１ 材料 ｈｈ－４数显恒温水浴锅（常州国华电器有限公司），ｒｅ ５２８５ａ旋转蒸发器（上海亚荣生华仪器厂），ｔｕ－１２２１型紫外分光光度计（北京普析通用有限公司），索氏提取装置。 对照品：菝葜皂苷元（中国药品生物制品检定所）；供试样品：小花玄参茎叶（２０１１年７月采于青海省玉树州代格村农作物地，中科院西北高原生物研究所鉴定）；所用试剂均为分析纯。 １．２ 方法 １．２．１ 供试品溶液的制备 称取０．５ ｇ小花玄参茎叶粉末（１００目），精确到０．０００ １ ｇ，置于索氏提取器中，加适量石油醚脱脂１ ｈ，冷却后，倾出石油醚提取液，残渣蒸干后加入甲醇１００ ｍｌ，提取至无色，回收减压至干，加蒸馏水１０ ｍｌ溶解，用饱和正丁醇萃取４次（１５、１０、１０和１０ ｍｌ），合并正丁醇部分，减压回收至干，加２０ ｍｌ ２ ｍｏｌ／ｌ hcl，水浴回流３ ｈ后冷至室温，用氯仿萃取３次，２０ ｍｌ／次，合并氯仿提取液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转至２５ ｍｌ容量瓶中，定容，制得供试品溶液。 １．２．２ 定性检识 ①醋酐－浓硫酸（ｌｉｅｂｅｒｍａｎｎ－ｂｕｒｃｈａｒｄ）检测：取供试液２ ｍｌ，沸水浴上蒸干，加入浓硫酸－醋酐（１∶２０，v/v）数滴，观察颜色变化情况；②三氯醋酸检测：将供试液滴在滤纸上，喷洒２５％（ｍ／ｖ）三氯醋酸－乙醇溶液，加热并观察６０ ℃和１００ ℃时颜色变化情况；③氯仿－浓硫酸（ｓａｌｋｏｗｓｋｉ）检测：将供试液水浴蒸发所得样品溶于氯仿后加入浓硫酸，观察氯仿层和硫酸层颜色和荧光。 １．２．３ 对照品溶液的制备 称取７．５ ｍｇ菝葜皂苷元对照品以甲醇定容于２５ ｍｌ容量瓶中，配制成０．３ ｍｇ／ｍｌ的对照品溶液。 １．２．４ 测定波长选择 分别精密吸取对照品溶液０．２ ｍｌ、供试品溶液０．１ ｍｌ置１０ ｍｌ具塞试管中，挥尽溶剂，加入５ ｍｌ高氯酸，７０ ℃水浴１５ ｍｉｎ，冰水冷却后，在２１０～４５０ ｎｍ范围内扫描，取最大吸收波长为检测波长。 １．２．５ 标准曲线制备 精密吸取不同体积的对照品溶液于１０ ｍｌ具塞试管中，挥干后加入５ ｍｌ高氯酸， 于７０ ℃水浴１５ ｍｉｎ，冰水冷却，最大吸收波长处测定吸光度，以浓度为横坐标（ｃ），吸光度为纵坐标（