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基因工程Genetic Engineering 生科院遗传室 盖树鹏 基本要求： 掌握基因克隆的基本工具、基本方法。 PCR技术基本原理和应用。 怎样利用基因重组技术研究基因的结构、表达和调控。 利用基因工程生产重组蛋白，基因工程在医药和农业上的应用。 根据酶切结果判读酶切图谱，以及判读DNA序列的能力。 能够设计一个基因克隆的程序。 参考书： Gene cloning, T.A. Brown. Third edition. 基因工程原理，吴乃虎编著，科学出版社 基因工程概论，张惠展编著，华东理工大学出版社。 植物基因工程原理与技术，王关林，方宏筠主编，科学出版社。 分子克隆实验指南，J. Sambtook, EF Frish, T Maniatis, 金冬雁，黎孟枫等译，科学出版社。 第一部分 基因克隆的基本原理 Chapter I 概论 生物工程、生物技术 基因工程的发展史 理论上的三大发现 技术上的三大发现 发展过程中的重大事件 基因工程的概念 概念、原理 基本步骤 基因克隆需要的工具和技术 基因工程的意义 1. 几个相关概念 生物工程：直接或间接利用生物体的机能生产物质的技术。包括发酵技术、基因重组、细胞融合、细胞大量培养、生物反应器等技术。 生物技术：生物技术是以现代生命科学为基础，结合先进的工程技术手段和其他基础学科的科学原理，按照预先的设计改造生物体或加工生物原料，为人类生产出所需的产品或达到某种目的。包括基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程等。 1. 几个相关概念 遗传工程：人工改造生物体遗传性的技术。包括细胞工程、染色体工程、细胞器工程、基因工程等 。 生物技术的范围最广。 2. 基因工程的发展史 2.1 理论上的三大发现 证明了生物的遗传物质是DNA（基因工程的先导） DNA的双螺旋结构和半保留复制机理 遗传信息的传递方式（中心法则） 2. 基因工程的发展史 2.2 技术上的三大发现 限制性内切酶和DNA连接酶的发现（标志着DNA重组时代的开始） 载体的使用 1970年，逆转录酶的发现。 2. 基因工程的发展史 1973年，Cohen等获得了抗四环素和新霉素的重组菌落TcrNer，标志着基因工程的诞生。 2. 基因工程的发展史 2.3 发展过程中的重大事件 1977年，E. coli中合成了人生长激素基因。 1978-1979胰岛素基因在大肠杆菌中表达。 1982年，培育出了超级鼠。 1985年Horsch发明了植物基因工程的基本方法：叶圆盘法，并获得转基因植株。 2.3 发展过程中的重大事件 1990年，患有遗传免疫疾病的4岁女孩接受了基因疗法。 1990年，Perlak 将B.T.基因导入棉花获得抗虫棉 。 1991年，美国开始人类基因组计划。 1997年，“多利”绵羊诞生。 3 基因工程的概念 3.1 概念 按照预先设计好的蓝图，利用现代分子生物学技术，特别是酶学技术，对遗传物质DNA直接进行体外重组操作与改造，将一种生物（供体）的基因转移到另外一种生物（受体）中去，从而实现受体生物的定向改造与改良。 3 基因工程的概念 3.1 概念 广义基因工程：DNA重组技术的产业化设计与应用。 上游技术：外源基因重组、克隆和表达的设计与构建（狭义基因工程） 下游技术：含有外源基因的生物细胞（基因工程菌或细胞）的大规模培养以及外源基因的表达、分离、纯化过程。 gene manipulation, gene cloning, recombinant DNA technology, genetic modification, new genetics, molecular agriculture 3.2 基本步骤：(切、接、转、增、检） 施工材料的准备：目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA和载体分子切开。 目的基因与载体DNA的体外重组，形成重组DNA分子。 把重组的DNA分子引入受体细胞，并建立起无性繁殖系。 筛选出所需要的无性繁殖系，并保证外源基因在受体细胞中稳定遗传、正确表达。 3.3 基因工程的基本原理 分子遗传、分子生物学以及生化工程学是基因工程原理的三大基石。 载体DNA自主复制的特性 提高基因剂量 提高宏观表达水平 一个完整的基因由三部分组成：启动子、编码序列与终止子。 筛选、修饰和重组启动子、增强子、终止子等基因的转录调控元件。 选择、修饰和重组核糖体结合位点及密码子等mRNA的翻译调控元件。 基因工程菌（细胞）是现代生物工程中的微型生物反应器 4 基因工程的意义 基因工程可以绕过远缘有性杂交的困难，使基因在微生物、植物、动物之间交流，迅速并定向的获得人类需要的新的生物类型 。 概括地讲，其