蚕豆病的设计性实验课件1.pptVIP

2012年设计性实验 组员：吴怡蓉、付世锦、 杨有稳、梁燕 患儿，男性，3岁，因面色苍白伴血尿1天入院。1天前食用新鲜蚕豆后，今日出现恶心、呕吐、排尿呈酱油样色，面色苍白。据家长反映，患者的姐姐也曾发生过类似情况。 体格检查：体温38℃，脉搏150次/分，呼吸40次/分，血压80/60mmHg，呼吸急促，神清，萎靡，面色苍白，皮肤及巩膜黄染，体型较同龄人瘦小。心、肺未及异常，肝、脾未触及，双肾区无叩击痛，神经系统检查未及异常。实验室检查：红细胞 1.98×1012/L，血红蛋白53g/L，血清总胆红素85.5μmol/L，结合胆红素13.7μmol/L，未结合胆红素71.8μmol/L，尿蛋白（++），潜血(+)，尿胆红素(－)，尿胆素原(+)，尿液镜下未见红细胞。 理论依据 溶血性黄疸 ：由于红细胞的大量破坏，使胆红素产生过多，超过了肝细胞摄取结合的能力，使得尿中尿胆原和尿胆素含量增多。葡糖-6-磷酸脱氢酶缺乏，输血不当均会引起病症 蚕豆病：葡糖-6-磷酸脱氢酶缺乏。患者大多在食用蚕豆后发生急性溶血性贫血。典型病人常出现由于大量红细胞破坏释放出胆红素二导致的溶血性黄疸 ，恶心呕吐，尿液呈酱油样等症状 诱因：一天前食用蚕豆 既往史：姐姐也曾出现过此症状 蚕豆病发病机制 食用蚕豆 产生大量过氧化氢，不被清除 红细胞膜脂质被氧化破坏 急性血管内溶血，产生过多胆红素 导致溶血性黄疸，恶心，呕吐，尿液呈酱油样 6-磷酸葡萄糖脱氢酶缺乏使磷酸戊糖途径受阻。NADPH+H+缺乏致血还原型谷胱甘肽生成不足。 红细胞被破坏，则可被肝等单核吞噬细胞识别并吞噬，释放血红蛋白，进一步分解为珠蛋白和血红素，而血红素被吞噬细胞降解为胆红素。 胆红素是人体内原型抗氧化剂，能够清楚超氧化剂和过氧化物自由基，因患儿体内有大量过氧化氢，氧化应激可诱导HO-1的表达，从而增加胆红素的量升高来抵御氧化应激状态。 从生化代谢解释患儿的临床表现和实验室检查结果 主要临床表现：1. 血尿、排酱油色尿、面 色苍白 2. 皮肤及巩膜黄染 3. 体温升高 4. 呼吸急促 实验设计 高铁血红蛋白还原法 实验思路 患者姐姐出现过此类状况推测属于家族性遗传，且患者在食用蚕豆后出现症状，故即有可能为蚕豆病。6-磷酸葡萄糖脱氢酶缺乏影响高铁血红蛋白的还原，故可以依据如下反应机制设计实验。 一、实验目的 1、检测患者体内6-磷酸葡萄糖脱氢酶活性以及发病原因 2、掌握高铁血红蛋白还原法测6-磷酸葡萄糖脱氢酶的实验原理及方法 3、了解蚕豆病的发病机制及原因 二、实验原理 在全血中加入亚硝酸钠，使红细胞中的亚铁血红蛋白氧化为高铁血红蛋白（MHb）,高铁血红蛋白在高铁血红蛋白还原酶的作用下又被还原为亚铁血红蛋白。在这过程中，高铁血红蛋白还原酶不仅需要亚甲蓝作为递氢体，还需要由G6PD参与磷酸戊糖途径形成NADPH作为辅酶才完成上述反应。所以，G6PD缺陷症的患者其MHb还原率下降（分光光度技术）。 三、实验器材及试剂 器材：离心机、分光光度计、微量移液器 水浴箱、1.5mlEP管、抗凝管，试管 试剂： ① 0.18mol/L亚硝酸钠-葡萄糖溶液、 ② 0.4mmol/L亚甲蓝溶液 、 ③ 0. 28 mol/ L 葡萄糖溶液、混合液 （等量①+②+③）、生理盐水、抗凝剂、患者静脉血、 蒸馏水 四、实验步骤 1、取静脉血1. 8mL 于抗凝管(含0. 2 mL109 mmol/ L抗凝剂+葡萄糖20 mg），混匀 2、离心沉淀 1000 r/ min 15 min 3、调整 血细胞∶血浆=1∶1 ，混匀 ，（调整后全血） 4、1ml 0. 18 mol/ L 亚硝酸钠、1ml 0. 28 mol/ L 葡萄糖溶液 、0.14 mmol/ L 亚甲基蓝液，混匀 ，得到混合试剂1ml 5、取试管3 支,标上A、B、S ,按下表加入试剂 六、实验结果 实验结果计算： 七、实验分析 该患者可能患有先天性镰刀贫血症或蚕豆病。 正常的高铁血红蛋白还原率75%，若计算所得还原率低于75%，且患者姐姐也有类似症状，患者吃过蚕豆后发病，故可推断患者患有蚕豆病 八、注意事项 * (+) 尿胆素原 (－) 尿胆红素 (+) 潜血 (++) 尿蛋白 0～13.68μmol/L 71.8μmol