研究成果最适展开支援事业-ipc.shimane.doc

- PAGE 1 - ■■研究の概要■■ 福島第一原発の事故により、放射性物質が大量に環境中に放出され、広範囲の土壌が放射能汚染した。今後、汚染した農地でこれまで通りの農業を行うことは難しく、安全かつ安心な農作物を東北地方において生産するための、新たな技術の開発（例えば、汚染土壌で栽培を行っても汚染物質を吸収しない新たな品種の開発や広範囲の汚染土壌を安価に浄化できる土壌浄化技術）が急務である。 マーカー選抜育種法が開発されるまでの品種改良は、腕利きの育種家による経験と感が頼りで、優良品種を作るためには長い年月が必要であった（10年単位）。現在はDNAマーカーを駆使したマーカー選抜育種技術が開発されたため、短期間に品種改良が行えるようになった（数年単位）。DNAマーカーとは、改良を行いたい形質（例えばおいしさや耐病性）を選抜するための目印である。DNAマーカーを用いた選抜は種子から芽が出た直後に葉の一部からDNAを抽出することで選抜できるため、植物体が大きくなるのを待つ必要がなく、栽培時間や面積、栽培にかかる労力の大幅な削減が行える画期的な方法であり品種改良の切り札となっている。DNAマーカーは形質を司る遺伝子の塩基配列をもとに設計することができるため、DNAマーカーの開発はすなわち形質（おいしさや耐病性といった）を司る遺伝子を特定することであるといえる（本研究ではセシウム輸送体のDNA塩基配列を特定すること）。 本実習はセシウムの吸収を司る輸送体の特定（DNA塩基配列の特定）を行い、セシウムの輸送に関わるDNAマーカーの作出を行うことを最終的な目的とする。セシウムの吸収量を決定するDNAマーカーが作出できれば、このDNAマーカーを使って、セシウムを吸収しない安全?安心な品種を短期間で選抜?育種することができる。また、セシウムを高吸収する環境浄化植物の選抜?育種も同様に行うことができる。 ■■これまでの経緯■■ 本実習ではセシウムの輸送体の単離を目指すが、植物の輸送体を単離する強力な解析方法として酵母タンパク質発現系がある。この実験系では、植物の膜輸送タンパク質をコードする遺伝子（DNA）を酵母に導入し、酵母の生体膜上に植物の膜輸送タンパク質を発現させる。この酵母の生育度合いや物質の取り込み量（能力）などを総合的に調査し輸送体の機能解明を行う。秋廣研究室は2008年から、イネの膜輸送タンパク質を全て発現する究極の酵母タンパク質発現ライブラリーの構築を行なってきた（下図）。イネには膜輸送タンパク質が約1500種類存在する。まず秋廣研はイネゲノムリソースセンターから1500種の完全長cDNA（膜輸送体の設計図）を全て入手した（下図；Point1）。入手した完全長cDNAは大腸菌発現ベクターに挿入されていたため、酵母タンパク質発現用ベクターに挿入しなおす必要があり、この挿入作業を2年間かけて行った（Point2）。ベクターに完全長cDNAが正しく挿入されたことを確認した後、酵母に形質転換（遺伝子を導入）した（Point3）。1500種類の遺伝子が導入された1500種類の酵母を全て異なる試験区で個別に培養した（Point4）。有害重金属であるヒ素やカドミウムを培地に添加し、重金属に耐性または感受性を示す酵母の特定を行った。その結果、これまでにヒ素やカドミウムの輸送体であることが報告されているクローンを含む数多くのクローンの単離に成功した（Point5）。 ■■分かった事（研究成果）■■ 右図は、秋廣研が作成したライブラリーを用いて、有害重金属であるカドミウムの輸送体を探索したときの結果の一部である。カドミウムを50μM含む培地に1500種類の酵母を植菌し、30℃にて2日間培養を行った。右図に示すとおり、大半の酵母がカドミウムを含む培地上で問題なく生育したが、生育できずに死滅する酵母もあった（矢印）。この酵母について詳細な解析を行ったところ、これらの酵母には、カドミウムの輸送に関与する膜輸送タンパク質をコードする遺伝子が導入されていることがわかった。これらの結果から、秋廣研にて構築した、「究極の酵母タンパク質発現ライブラリー」は有害重金属の輸送体を単離する強力な解析手法であることがわかる。 秋廣研究室が開発したライブラリーは、イネに存在する全ての膜輸送タンパク質を発現しているため、膜輸送体の単離において究極のライブラリーであると言える（世界に一つの技術シーズ）。感受性株を単離することができる点も特筆すべき特徴である（これも世界に一つの技術シーズ）。本研究で単離を目指すセシウム輸送体もこの1500個の中に必ず含まれていると考えられることから、セシウムの輸送体を単離することは実現可能である。 ■■本実習の最終目標と到達目標■■ 本研究の最終