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第一章 绪论体外培养（in vitro culture）：是将活体结构成分（如活体组织、活体细胞或活体器官等）甚或活的个体从体内或其寄生体内取出，模拟体内的生理环境，在无菌、适当温度和一定营养条件下使之存活和生长发育的方法。 按照体外培养的结构成分，可将体外培养人为分为： 组织培养（tissue culture）指从生物体内取出活的组织（多指组织块）在体外进行培养的方法。 细胞培养 （cell culture）指将活细胞（尤其是分散的细胞）在体外进行培养的方法。 器官培养 （organ culture）指从生物体内取出活的器官（一般是胚胎器官）、器官的一部分或者器官原基在体外进行培养的方法。单一化现象 组织培养过程中，培养组织不能在体外长期维持其结构和功能，培养的时间长，经过反复传代，细胞出现单一化现象——趋向单一类型的细胞——最终成为细胞培养。体内培养（in vivo culture)：将活体结构成分（如活体组织、活体细胞、活体器官等）甚至活的个体从体内或其寄生体内取出，放在其他生物体内让其生长和发育的方法。最常见的体内培养方式就是移植（trans-plantation）。体外培养技术创立代表性的人或者实验Harrison的工作，较为完善地建立了体外培养活体组织的培养体系，第一次较为系统地观察了体外培养活体组织的结果。被公认为是体外培养技术的的开始。标志着体外培养技术的创立，标志着盖玻片悬滴培养法的建立，标志着神经组织体外培养的开始，也标志着神经突起是由神经细胞长出的这一重大理论的诞生。Carrel对体外培养的贡献： ◆将无菌操作观念引入体外培养过程中。 ◆将培养组织包埋技术、营养供应以及继续培养（也称传代或继代培养）等许多重要的培养条件和方法引入盖玻片悬滴培养系统，从而完善了Harrison的方法。 ◆发现鸡胚浸液能明显地促进多种细胞的体外生长。 ◆设计卡氏培养瓶减少了污染，扩大了细胞生存空间。现在一般认为体外培养技术是从Harrison和Carrel真正开始的。两位美国科学家W.H.Lewis和M.R.Lewis最先试用已知成分的合成培养基取代不能准确确定其成分的天然培养基，由于他们和其它许多科学家在此后30多年的努力，最终发展出许多合成培养基。现代组织培养的三个阶段：第一阶段 悬滴培养第二阶段 单层培养第三阶段 三维培养（立体培养）现代组织培养的重要标志： ● 培养液的改变 ● 培养容器的改变 ● 培养方法的改进：液体培养基的应用; 单细胞分离培养法● 细胞培养用的多种材料都已商品化、规范化和系列化。 ● 低温冷冻技术的应用，可将已建立的多种细胞系和细胞株长期冻存。● 细胞培养技术更加广泛地用于生物学和医学研究.对体外培养技术的评价● 能长时间直接观察活细胞的形态结构和功能活动，是多学科进行科学研究的对象和工具，如细胞学、遗传学、免疫学和肿瘤学等。 ● 供研究的细胞种类极为广泛，从低等生物到人，或正常组织或肿瘤组织细胞，而且便于记录（通过摄影、闭路电视和摄电影等方式） ● 易施加理化因素和生物因素进行实验研究。如研究某种实验因素对细胞的生物学作用 ，只需在培养液中有针对性地加入或删除该成分即可。 ● 可同时方便获得大量细胞类型单一、细胞周期同步、生物学性状基本相同并对实验因素反应一致的细胞群。●?能够进行大规模生物制品的生产。利用体外培养技术可以大量繁殖动物细胞或微生物以生产生物制品。 ●与体内环境相比，体外培养细胞在一定程度上失去了组织联系及相互作用，缺乏在体内时的血运和神经体液调节作用，因此不能将体外实验结果一并推至体内，即不能轻易下结论。组织培养常用术语Anchorage-dependent cells or cultures（贴壁依赖性细胞或培养物）：体外培养的细胞只有贴附在不起化学作用的物体的表面时才能生长、生存或维持功能。Apoptosis（细胞凋亡）：是指细胞内死亡程序的启动而导致细胞自杀的过程，因此也常称为程序性细胞死亡（programmed cell death)。细胞凋亡与机体正常发育、形态形成以及多余细胞的清除等生理过程密切相关，所以被认为是一种积极的生理性死亡。Cell culture（细胞培养）：细胞在体外条件下的生长。Cell fusion（细胞融合）：体外培养条件下，经化学试剂、病毒或物理方法诱发，使同种或不同种的2个或2个以上体细胞融合产生杂交细胞的过程。cell generation time（细胞一代时间）：是指单个细胞两次连续分裂的时间间隔。可借助显微镜电影照相术来精确确定。cell line（细胞系）：原代培养物经首次传代成功后即成为细胞系。Clone（克隆）：单个细胞通过有丝分裂形成的细胞群体，他们的遗传特性相同。Confluence（汇合）：指在细胞培养瓶中培养