构建HSA-PEI-pcDNA-Apoptin复合物及对乳腺癌细胞增殖的影响.docVIP

构建HSA-PEI-pcDNA-Apoptin复合物及对乳腺癌细胞增殖的影响 刘逸之1，赵新汉2，吕卫东3，常柏玲1(陕西省肿瘤医院，1肿瘤内科，3胸外科，陕西省西安市 710061；2西安交通大学第一附属医院肿瘤内科，陕西省西安市 710061) 引用本文：刘逸之，赵新汉，吕卫东，常柏玲. 构建HSA-PEI-pcDNA-Apoptin复合物及对乳腺癌细胞增殖的影响[J].中国组织工程研究，2016，20(49):7425-7430. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.49.019 ORCID: 0000-0003-2685-4218(吕卫东) 文章快速阅读： 文题释义： HSA-PEI-pcDNA-Apoptin复合物：是将构建含Apoptin基因的真核表达载体pcDNA-Apoptin，经电荷中和效应与人血白蛋白-聚醚酰亚胺(HSA-PEI)复合物连接，形成相应复合物。因其带有Apoptin基因，故具有Apoptin基因的诱导肿瘤特异性细胞凋亡作用而对正常细胞无毒性。 细胞凋亡素(Apoptin)：是一种具有高度保守性的蛋白，其只诱导癌细胞或有成癌倾向的细胞凋亡，对各种原代正常细胞均没有杀伤效应。此外，Apoptin诱导凋亡的的机制是非P53依赖性凋亡，且不受抗凋亡因子Bcl-2的抑制。Apoptin有望成为一种极具应用前景的抗肿瘤制剂。 摘要 背景：凋亡素(Apoptin)能诱导50种以上不同类型的肿瘤细胞凋亡，有望成为一种极具应用前景的抗肿瘤制剂。如何安全、有效地将其应用于临床，是一个亟待解决的最具现实意义的问题。 目的：拟制备人血清白蛋白(HSA)与Apoptin基因的复合物，通过体内外实验验证其抗瘤效果，为Apoptin尽早应用于基因治疗寻找一个简单有效的转移方式。 方法：①构建含Apoptin基因的真核表达载体pcDNA-Apoptin。以水溶性碳二亚胺(EDC)为交联剂，将聚醚酰亚胺(PEI)与人血清白蛋白(HSA)连接，合成HSA-PEI复合物，然后经电荷中和效应将HSA-PEI复合物与pcDNA-Apoptin重组体及pcDNA空载体分别连接，形成相应HSA-PEI-pcDNA-Apoptin复合物；②将HSA-PEI-pcDNA-Apoptin复合物转染乳腺癌MCF-7细胞，Western blot检测Apoptin基因在细胞中的表达，MTT法和流式细胞术检测转染后细胞增殖情况；③建立裸鼠乳腺癌模型，使用尾静脉注射法，分别将0.5 mL HSA-PEI-pcDNA-Apoptin、HSA-PEI-pcDNA及生理盐水注射入裸鼠体内，4周后测量肿瘤体积。 结果与结论：①成功构建并鉴定了HSA-PEI-pcDNA-Apoptin复合物，体外成功转染乳腺癌MCF-7细胞；②HSA-PEI-pcDNA-Apoptin转染MCF-7细胞24 h有Apoptin蛋白的表达，而转染HSA-PEI-pcDNA细胞及空白对照组细胞未见Apoptin蛋白的表达；③体外细胞增殖实验提示HSA-PEI-pcDNA-Apoptin组吸光度值明显低于HSA-PEI-pcDNA组及空白对照组(P 0.05)；④裸鼠乳腺癌模型HSA-PEI-pcDNA-Apoptin组肿瘤体积小于HSA-PEI-pcDNA组及空白对照组(P 0.05)；⑤结果表明，HSA-PEI-pcDNA-Apoptin复合物有明显的抑制肿瘤作用。 关键词： 实验动物；细胞损伤与修复模型；凋亡素；乳腺癌；增殖；基因治疗；人血清白蛋白；载体；细胞凋亡；细胞转染；体外培养；陕西省自然科学基金 主题词： 乳腺肿瘤；细胞凋亡；基因疗法；组织工程 基金资助： 陕西省自然科学基金面上项目(2013JM3010) Preparation of HSA-PEI-pcDNA-Apoptin and its effect on the proliferation of breast cancer MCF-7 cells Liu Yi-zhi1, Zhao Xin-han2, Lv Wei-dong3, Chang Bai-ling1 (1Department of Medical Oncology, 3Department of Thoracic Surgery, Tumor Hospital of Shaanxi Province, Xi’an 710061, Shaanxi Province, China; 2Department of Medical Oncology, First Affiliated Hospital of Xi’an Jiaotong Universit