11第十一章吸光光度法.ppt

（二）多组分的测定 Y X Y X （三）吸收池 （四）检测系统 可见光区：光学玻璃池；紫外区：石英池 用于盛待测及参比溶液（0.5、1、2、3cm） 利用光电效应，将光能转换成电流讯号 硒光电池，光电管，光电倍增管 适用于300-800 nm, 在500-600 nm范围最灵敏。较长时间连续使用会产生“疲劳”现象 红敏管（阴极：银和氧化铯） 625-1000 nm 蓝敏管（阴极：锑铯） 200-625 nm 使用波长范围：160-700 nm 1个光子可产生106～107个电子 （五）信号显示系统 早期的分光光度计：指针式系统 如：检流计（72型）、微安表（721型） 、电位计（751型） 现代的分光光度计：数字电压表、函数记录仪、示波器及数字处理台等 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 1.0 1.5 ∞ 二、吸光度的检测原理 分光光度计实际上测得的是光电流或电压，通过转换器将测得的电流或电压转换为对应的吸光度A 调节检测器零点，即仪器的机械零点：A=∞ 应用不含待测组分的参比溶液调节吸光零点：A=0 待测组分吸光度的测定：Ax 测定步骤： 三、分光光度计的类型 根据波长分：可见分光光度计、紫外－可见分光光度计、红外分光光度计 根据结构分：单光束分光光度计、双光束分光光度计、双波长分光光度计 优点：结构简单、价格低廉、适用于固定波长下的定量分析 缺定：由于光源和检测系统的不稳定会产生误差；无法进行吸收光谱的自动扫描；不适用于经常变更测量波长的定性分析 单光束 单色器 吸收池 R S 光源 检测器 光源 单色器 S R 检测器 双光束 优点：参比和试液的测量几乎同时进行，补偿了因光源和检测系统的不稳定而造成的影响；具有较高的测量精密度和准确度；测量便捷；自动扫描吸收光谱 缺点：价格较昂贵 双波长 光源 单色器 单色器 吸收池 检测器 纤维光度计 第四节 吸光光度法分析条件的选择 一、显色反应及其条件的选择 （一）显色反应和显色剂 显色反应：在分光光度分析中，将试样中被测组分转变成有色化合物的反应 显色剂：与被测组分反应使之生成有色物质的试剂 显色反应可分为：络合反应和氧化还原反应 1、显色反应 选择显色反应的一般标准 选择性要好：一种显色剂最好只与一种被测组分起显色反应，这样干扰就少。或者干扰离子容易被消除、或者显色剂与被测组分和干扰离子生成的有色化合物的吸收峰相隔较远 灵敏度要高：灵敏度高的显色反应对于微量组分的测定尤为重要。但应注意：灵敏度高的显色反应，并不一定选择性就好；对于高含量的组分不一定要选用灵敏度高的显色反应 对比度要大：即如果显色剂有颜色，则有色化合物与显色剂的最大吸收波长的差别要大，一般要求在60nm以上 2、显色剂 缺点：多数无机显色剂与金属离子形成的络合物的稳定性差、灵敏度和选择性都不高 （1）无机显色剂 硫氰酸盐（测铁、钼、钨、铌） 钼酸铵（测硅、磷、钒） 氨水（测铜、钴、镍） 过氧化氢（测钛、钒、铌） 显色反应的条件要易于控制 有色化合物的组成要恒定,化学性质要稳定 优点：有机显色剂与金属离子形成稳定的、具有特征颜色的鳌合物，灵敏度和选择性都较高 （2）有机显色剂 提高灵敏度的方法：增大有机显色分子的共轭体系和在显色分子中引入取代基 生色团 助色团 常用的有机显色剂：邻二氮菲、双硫腙、二甲酚 橙、偶氮胂III、铬天青S等 （二）显色反应条件的选择 1、显色剂的用量 2、溶液的酸度 （1）对被测物质存在状态的影响 （2）对显色剂浓度和颜色的影响 （3）对络合物组成和颜色的影响 （吡啶偶氮+氨基甲苯） 25℃ 100℃ t /min A 3、时间和温度 100℃ 硅钼酸法测硅 时间包括显色时间和稳定时间，温度对二者均产生影响 4、有机溶剂和表面活性剂 表面活性剂的加入可以提高显色反应的灵敏度，增加有色化合物的稳定性。其作用原理一方面是胶束增溶，另一方面是可形成含有表面活性剂的多元络合物。 有机溶剂可以降低有色络合物的解离度， 从而提高显色反应的灵敏度；此外，有机溶剂还可以影响反应速率，络合物的颜色、溶解度及组成等 合适的有机溶解和表面活性剂及其用量均通过实验来确定 5、共存离子的干扰及消除 显色条件下，共存离子发生水解、析出沉淀，导致溶液混浊无法测定 共存离子本身有颜色或与显色剂反应生成有色化合物