色谱法基础课件.ppt

第十三章色谱法基础 13.1概述 俄国植物学家茨维特在1903年使用的装置： 色谱原型 色谱法是一种分离技术， 试样混合物的分离过程也就是试样中各组分 在称之为色谱分离柱中的两相间不断进行着 的分配过程， 其中的一相固定不动，称为固定相； 另一相是携带试样混合物流过此固定相的流体 （气体或液体），称为流动相。 当流动相中携带的混合物流经固定相时，其与 固定相发生相互作用。由于混合物中各组分在 性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作 用力的大小、强弱不同，随着流动相的移动， 混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，使 得各组分被固定相保留的时间不同，从而按一 定次序由固定相中流出。与适当的柱后检测方 法结合，实现混合物中各组分的分离与检测。 两相及两相的相对运动构成了色谱法的基础。 13.1.2色谱法分类 按流动相：液相色谱（LC）；气相色谱（GC）；超临界流体色谱（SFC） 按固定相形状：柱色谱；平面色谱（纸色谱、薄层色谱） 按固定相聚集态及利用原理： 13.1.3色谱法特点 1. 分离效率高： 复杂混合物，有机同系物、异构体。手性异构体。 2. 灵敏度高： 可以检测出μg.g-1(10-6)级甚至ng.g-1(10-9)级的物质量. 3. 分析速度快： 一般在几分钟或几十分钟内可以完成一个试样的分析。 4. 应用范围广： 适用于沸点低于400℃的各种有机或无机试样及生物活性物质的分析。 13.2色谱图和有关术语 13.2.2保留值 2.用体积表示的保留值 死体积（VM）： VM = tM ×Fc ， 即不被固定相滞留的组分从进样到最大峰所需的流动相体积。 保留体积（VR）：VR = tR×Fc ，即组分从进样到最大峰所需的流动相体积。 （ Fc为色谱柱出口处的载气流量，单位：m L / min。） 调整保留体积（VR＇）： V R＇= VR －VM = tR ＇×Fc 4.分离因子 ? 相同条件下，两相邻组分调整保留值之比 ?=tR ＇（2）/ tR ＇（1）= VR ＇（2）/ VR ＇（1） （α≥1） 13.2.4分配系数和容量因子 1.分配系数K：平衡时，组分在固定相S与流动相m间的浓度比； K=Cs/Cm 反映了组分与两相间相互作用的大小。K大则滞留时间长。 13.3色谱基础理论 13.3.1塔板理论 二.柱分离效能指标 柱效能是色谱柱在色谱分离过程中只由动力学因素所 决定的分离效能，通常用理论板数n、理论板高H、或有 效板neff高表示。 13.3.2速率理论 由于柱内很难真正达到平衡，随组分在柱内的迁移， 组分谱带宽度会逐渐增加，称为谱带扩张。程度用H 表示。 塔板理论无法解释同一色谱柱在不同的载气流速下柱 效不同的实验结果，也无法指出影响柱效的因素及提 高柱效的途径。 速率理论为色谱分离和操作条件的选择提供了理论指 导。阐明了流速和柱温对柱效及分离的影响。 一.影响谱带扩张的因素 1.扩散 2.传质阻力 组分在流动相和固定相间分配必然有分子在两相间 交换、扩散的过程，称为传质。 组分在两相间分配不能瞬时完成，妨碍组分快速传 递以达成平衡，导致有限传质速率叫传质阻力。 二.速率理论方程简介 将造成谱带扩张的动力学因素联系起来建立偏微分方程，解出 速率理论方程，以板高H和流动相线速率U关系式来表达。 1.van Deemter方程 适用于填充柱气液色谱 H = A + B/U + C·U B/U—分子扩散项： B = 2rDg U：载气线流速 r ：曲折因子，反映固定相颗粒间空间结构，填充柱色谱 r=0.5-0.15，空心柱r=1。 Dg：试样组分分子在气相中的扩散系数（cm2·s-1） 存在着浓度差，产生纵向扩散， 扩散导致色谱峰变宽，H↑(n↓)，分离变差。 分子扩散项与流速有关，流速↓，滞留时间↑，扩散↑， 扩散系数：Dg ∝（M载气）-1/2 ； M载气↑，B值↓。 C · U──传质阻力项： 传质阻力包括气相传质阻力Cg和液相传质阻力CL即： C =（Cg + CL） 载气流速与柱效-最佳流速 H = A + B/U + C·U 可见A与U无关，U有一最佳取值使H最小。 载气流速高时： 传质阻力项是影响柱效的主要因素，随着流速的提高，柱效下降。 载气流速低时： 分子扩散项成为影响柱效的主要因素，随着流速的增加，柱效提高。 2.Golay方程