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6、基因芯片 集成化的核酸分子杂交技术 * * 谢 谢 肿瘤的分子生物学检验 2015.11.30 肿瘤标志物的研究历史 第1阶段(1963-1978):癌胚性抗原 1963年 Abelev AFP 1965年 Gold Freeman CEA 第2阶段(1979-1989):糖链抗原为主 1980年 Koprowski CA19-9(1116-NS-19-9) 1981年 Bast CA125(OC125) 第3阶段(1990以后):基因标志 肿瘤基因标志 * 一、原癌基因(oncogene,onc)及其表达产物的作用1、定义: 原癌基因是指人类或其他动物细胞(以及致癌病毒)固有的一类基因,能诱导细胞正常转化并使之获得新生物特征的基因总称。原癌基因包括病毒癌基因(v-onc)和细胞癌基因(c-onc)两种,它们在正常情况下以非激活的形式存在,故称原癌基因。负责调控正常细胞的生命活动,包括细胞增生、生长因子信号传递、细胞周期进展、细胞存活以及DNA转录等。一旦这类基因发生某些错误或功能丧失时,极易导致原癌基因转变为可使正常细胞转化为肿瘤的转化基因或癌基因。 * * 2、特点:(1)v-onc是病毒基因组中特殊的核苷酸序列,能 引起细胞转化(2)c-onc是存在于正常细胞基因组中的癌基因, 在正常情况下处于静止或低表达的状态,不 仅对细胞无害,而且对维持细胞正常功能具 有重要作用,但在异常表达时,其产物可使 细胞无限制分裂 * 细胞癌基因与病毒癌基因核酸序列有同源性即它们的DNA序列是相对应的,表达产物也基本相同 细胞癌基因的作用:通过其表达产物蛋白质来体现的,负责调控正常细胞的生命活动,包括细胞增生、生长因子信号传递、细胞周期进展、细胞存活以及DNA转录等。 * * 二、癌基因 定义:原癌基因在进化上高度保守,负责调控正常细胞的生命 活动,包括细胞增生、生长因子信号传递、细胞周期进展、细 胞存活以及DNA转录等。一旦这类基因发生某些错误或功能丧失 时,极易导致原癌基因转变为可使正常细胞转化为肿瘤的转 化基因或癌基因 三、原癌基因的激活机制 原癌基因具有正常的生理功能,被激活时又具有致癌能力,因此研究原癌基因如何被激活是很重要的。 现已证实 射线辐射 化学致癌剂 病毒感染 * (一)原癌基因点突变(point mutation) 癌基因在编码顺序的特定位置上的某一个核苷酸发生突变,使其表达蛋白质中相应的氨基酸发生变化,从而获得了转化细胞的活性 * mutation (二)原癌基因获得外源启动子而激活 肿瘤细胞中原癌基因的表达水平可以其转录的mRNA或翻译产物蛋白质的含量来表示 在原癌基因的上游插入外源性启动子或增强子可激活原癌基因,使其表达产物增多 病毒的增强子常位于5’端的长末端重复序列(1ong terminal repeat,LTR)内。如果增强子插入到原癌基因的附近或远处,均使之激活,促使癌基因的表达比正常表达增高几十甚至上百倍 * (三)原癌基因甲基化程度降低而激活 DNA分子中的甲基化(methylation)对阻抑基因的转录具有重要作用 * 现已发现在结肠腺癌和小细胞肺癌的细胞中,ras基因的DNA甲基化水平比其邻近的正常细胞明显偏低,提示某些原癌基因是由于甲基化程度降低而激活 * (四)原癌基因的拷贝数增加基因扩增(amplification): 某些癌基因通过一些机制在原来的染色体上复制多个拷贝,超出了正常细胞的癌基因剂量,导致基因产物的增加,从而使细胞正常功能紊乱 例如: 人视网膜母细胞瘤:N-myc扩增了10-200倍,相应的mRNA和蛋白质产物也都大量增加 * (五)基因易位或重排使原癌基因激活 基因易位(translocation)基因重排(rearrangemant): 有些癌基因从其染色体的正常位置转移到另一染色体的某个位置,由于调控环境发生变化,导致从相对静止状态变成激活状态,使原癌基因表达产物显著增加而导致肿瘤的发生 * 染色体易位使位于9q34的c-abl基因转移到第22对染色体上,重排形成bcr-abl融合基因,使表达增高,蛋白质产物也由p145变成p210,其酪氨酸蛋白激酶活性大为增加,导致慢性粒细胞白血病的发生 * 四
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