实验三革兰氏染色与芽孢染色范例.ppt

实验三 革兰氏染色和芽孢染色 一、实验目的 二、实验原理 三、实验器材（详略） 四、实验内容步骤 五、实验结果及思考题 掌握 实验目的 显微镜油浸系物镜的原理和用法 革兰氏染色的原理和方法 芽孢染色的原理和方法 d = 0.5 λ n sinθ λ：所用光源波长 n：玻片与物镜间介质的折射率 θ：光线最大入射角的半数 （一）显微镜油浸系物镜的原理 实验原理 很多原来由于在透镜及载片表面的反射和折射而损失的 光线可以进入物镜，使照明亮度提高，改善观察效果。 用浸没油取代空气的作用： 介质折射率提高 数值孔径值和分辨力均得到提高 浸没油与玻璃的折射率相近 Air:1, water:1.33, oil:1.52, glass:1.54 （二）革兰氏染色的原理 实验原理 G+：单层：肽聚糖（厚且致密，20-80nm）；磷壁酸 G-：多层：肽聚糖（薄且稀疏，7-8nm，含脂质）；外膜 G+ 菌：细胞壁厚，肽聚糖含量高，交联度大，当乙醇脱色时，肽聚糖因脱水而孔径缩小，故结晶紫-碘复合物被阻留在细胞内，细胞不能被酒精脱色，仍呈紫色。 G- 菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，因其含脂量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，酒精将细胞脱色，细胞无色，沙黄复染后呈红色。 （三）芽孢染色的原理 实验原理 核心 皮层 芽孢衣 孢外壁 用着色力强的染色剂孔雀绿或石炭酸复红，在加热条件下染色，使染料不仅进入菌体也可进入芽孢内，进入菌体的染料经水洗后被脱色，而芽孢一经着色难以被水洗脱，当用对比度大的复染剂染色后，芽孢仍保留初染剂的颜色，而菌体和芽孢囊被染成复染剂的颜色，使芽饱和菌体更易于区分。 实验内容步骤 （一）显微镜油浸系物镜的使用 1. 准备 2. 显微观察 低倍镜观察 高倍镜观察 油镜观察 3. 显微镜用毕后的处理 实验内容步骤 （二）革兰氏染色方法步骤 革 兰 氏 染 色 法 涂片、干燥、固定 结晶紫初染1~2min,水洗 碘液媒染1 min,水洗 水洗 沙黄（即番红）复染（2min） 水洗 油镜镜检：蓝紫色 G+；红色G- 乙醇脱色（约30s左右） 芽 孢 染 色 法 涂片、干燥、固定 孔雀绿染色（加热） 冷却、水洗 番红复染 水洗、吸干 镜检 实验内容步骤 （三）芽孢染色方法步骤 3、使用油镜应注意哪些问题？ 5、为什么芽孢染色需要进行加热？能否用简单染色法观察到细菌芽孢？ 2、绘图表示枯草芽孢杆菌的形态，注意芽孢的形状、位置及芽孢囊的形状特征。 1、绘图并说明大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的形状、颜色和革兰氏染色反应。 实验结果及思考题 4、革兰氏染色是否成功，有哪些问题需要注意，为什么？为什么用老龄菌进行革兰氏染色会造成假阴性？