纳米金表面的寡核苷酸修饰.ppt

毕业论文答辩 一、重金属的危害 二、纳米金的性质，制备及应用 三、纳米金放大传感器检测汞离子 四、鱼精DNA修饰纳米金共振散射光谱法检测汞离子 一、重金属的危害 重金属是相对密度大于5的金属元素，共45种，如铁、铜、汞、砷、铅等。除人体必需的14种微量元素外，如铁、锌、铬、硅、钴、锰、铜、镍、锡等，如铅、汞、砷等多数重金属元素不是人体新陈代谢及生理作用必需的，并且重金属在体内是一个不断积累的过程，随着重金属的不断积累会威胁到人类的生命健康，尤其像铬、汞、砷、铅、镉等5种元素的毒性最大。重金属在体内不断的积累，毒性被放大，引起神经错乱、失眠、头痛、癌症等，并严重的损伤消化系统、皮肤、神经系统等。 造成污染的重金属元素主要来源于工业生产如：矿山开采、冶金、电镀等以及城市生活等排出的废水、废气和废渣。这些污染物能通过大气、水体环流、食物链等传播，影响到土壤、相关的动植物，以及人体。总之，重金属是一种非常危险的污染物，各种生态系统都不同程度地受到重金属的影响。 二、纳米金的性质，制备及应用 三、纳米金放大传感器检测汞离子 利用Hg2+与DNA中胸腺嘧啶(T)结合的高度特异性和纳米金在石英晶体微天平（QCM )上的信号放大作用, 设计了一种简便灵敏的 Hg2+检测方法。纳米金采用柠檬酸钠还原法制备,其表面用末端带巯基的寡核苷酸探针进行自组装修饰,并用6-巯基己-1-醇(MCH )部分取代表面探针,以减少杂交空间位阻。 1、仪器与试剂 UV-2450型紫外-可见分光光度计，TECRA I -20型透射式电子显微镜， PSC2UD01压电芯片与 EXCE100压电传感实时分析仪，AA2610型原子吸收分光光度计，汞空心阴极灯。 1 .00mmo l/L Hg(NO3)2 标准溶液; 缓冲液为10mmol/L Na H2PO4-Na 2HPO4 + 0 .10mol /L NaN( p H 7.4 ,记为 PBN); Piranha溶液: V( 70 % H2SO4 )：V( 30 % H2O2 ) = 3：1 ;设计DNA序列;氯金酸和柠檬酸钠;所用试剂均为分析纯,实验用水为二次蒸馏水。 2、 用柠檬酸钠还原法制备纳米金 3、QCM金电极表面的寡核苷酸修饰 镀金石英晶片在使用前用 Piranha溶液清洗 5min,用N2吹干,加入 10 mol/L巯基修饰的寡核苷酸A溶液在室温下自组装 12 h ,然后用 PBN缓冲液清洗。为避免 DNA在金电极上自组装时出现相互缠绕或 DNA磷酸骨架与金电极的非特异性吸附,采用寡核苷酸A与6-巯基己-1-醇(MCH )摩尔比为 1：10的混合液在 QCM金电极表面自组装。 4、纳米金表面的寡核苷酸修饰 取10nm的纳米金溶液(浓度为32nmol/L) 100L ,加入与纳米金摩尔比为 200 :1的巯基修饰的寡核苷酸 B溶液,室温反应24h后,在PBN中室温静置老化 48 h ,以16000r/min离心30m in ,除去上清液清洗两次后,分散到PBN中;再加入 20L 0.10mmol/LMCH溶液, 混匀,放置30min后加入等体积的乙酸乙酯,使反应终止,离心方法同上,最后分散到100LPBN中,纳米金浓度保持在 32nmol/L。MCH起到封闭纳米金表面上的非特异性结合位点和部分取代表面寡核苷酸的作用,以降低纳米金表面寡核苷酸密度、 减少空间位阻、 提高杂交效率。 5、Hg2+的检测 在 QCM检测池中加入380L PBN,启动QCM检测平台,开始记录频率,频率( f0 )稳定后,分别加入10L寡核苷酸修饰纳米金(B-NG)和待测Hg2+溶液,观测 QCM 频率变化( f = f- f 0 ),频率稳定后,加入与 Hg2+形成更稳定螯合物的半胱氨酸溶液 (1mmol/L),进行传感器的再生。f与电极表面质量变化成正比,而质量变化取决于QCM电极表面结合的纳米金。据此, f与溶液中Hg2+浓度成正比,用于Hg2+的定量检测，检测在室温下进行。 6、结论 将纳米金和 DNA相结合,设计了一种基于纳米金放大的 QCM 检测方法,实现了对水中 Hg2+离子的检测。本方法与荧光法、比色法等相比,灵敏度高,背景干扰小, 无需复杂的荧光检测设备。可以通过人工合成能特异结合其它金属离子的碱基,并检测这些金属离子。 四、鱼精DNA修饰纳米金共振散射光谱法检测汞离子 Hg2+可与鱼精DNA形成稳定的DNA—Hg2+结合物，将其与