葛黄颗粒水提取工艺研究.docVIP

葛黄颗粒水提取工艺研究 　　摘要：目的优选葛黄颗粒水提取工艺。方法以水提取物中有效组分多糖为指标，采用苯酚-硫酸法测定多糖的含量，运用正交设计法优选葛黄颗粒水提取工艺。结果葛黄颗粒的最佳水提取工艺为加12倍量水浸泡1 h，煎煮 3 次，每次煎煮1 h。结论采用该水提工艺提取，水提取物中多糖的收率较高且稳定。 　　关键词：水提取工艺；正交设计；多糖 　　中图分类号：R284文献标志码：A文章编号：1007-2349（2016）11-0079-02 　　葛黄颗粒是本院自制的复方中药制剂，具有醒酒解毒、健脾疏肝、清热利湿之功效，具有良好的解酒、保肝和降脂作用。处方含茯苓、党参、柴胡等中药均含有多糖，多糖具有解酒、保肝等药理作用且易溶于水，所以采用煎煮法提取。用苯酚―硫酸法测定多糖的含量，采用正交设计优选最佳水提取工艺。 　　1实验部分 　　仪器与材料：HH-S8水浴锅；JA203H天平；AUW120D精密天平；754型紫外可见分光；JPCT0328超声机；D-无水葡萄糖（批号110833-201205，供含量测定用，中国食品药品检定研究院）；苯酚（分析纯）；硫酸（分析纯）；多效蒸馏水（西南医科大学附属中医医院制剂室）。 　　2方法与结果 　　2.1正交试验样品的制备选择加水量、浸泡时间、煎煮时间、煎煮次数为因素，选用L9（34）因素水平表安排正交试验。按1/2处方准确称取9 份样品，每份85 g，按表 1中9 种工艺条件组合进行水提取法提取，提取液水浴浓缩成干浸膏备用。 　　2.2正交试验样品中总多糖含量测定 　　2.2.1干浸膏收率的测定取正交试验浸膏，水浴蒸干，105℃烘至恒重，精密称定，计算干浸膏收率，结果见表3。 　　2.2.2对照品溶液的配制精密称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品18.9 mg，加水使之溶解于100 mL量瓶中，稀释至刻度，摇匀，即得浓度为0.189 mg/ml的葡萄糖对照品溶液。 　　2.2.35%苯酚溶液的配制取苯酚100 g，加铝粉100 mg，碳酸氢钠50 mg，蒸馏收集182℃馏分，取馏分5 g，加水至100 mL，摇匀，置棕色瓶中备用。 　　2.2.4供试品溶液的制备精密称取干浸膏粉0.05 g，精密加入50 mL蒸馏水，超声提取30 min，滤过，取续滤液，即得。 　　2.2.5硫酸用量的选择精密吸取供试品溶液0.1 mL 3份，分别置于10 mL试管中，加水使成2.0mL，各精密加入5%苯酚1.0 mL，摇匀，迅速滴加浓硫酸5.0、6.0、7.0 mL，摇匀，放置30 min冷却后，在分光光度仪上490 nm处测定吸光度值，为0.309，0.308，0.310。结果表明：浓硫酸用量为5.0 mL时，反应即可完全。 　　2.2.6试验温度的选择精密吸取供试品溶液各0.1 mL，分别置10 mL试管中，加水使成2.0 mL，各精密加入5%苯酚1.0 mL，摇匀，迅速滴加浓硫酸5.0 mL，摇匀，分为3组：室温放置30 min；40℃保温30 min，放冷至室温；置沸水浴中加热25 min，再放于冰水浴中15 min。分别在490 nm处测定吸光度值，分别为0.311，0.322，0.336。实验结果表明：置沸水浴中加热25 min，再放于冰水浴中15 min较其他方法反应完全。 　　2.2.7葡萄糖标准曲线的制备精密吸取葡萄糖对照品溶液0.1，0.2，0.4，0.8，1.0 mL分别置10 mL试管中，加水使成2.0 mL，摇匀，迅速滴加浓硫酸5.0 mL，摇匀，置沸水浴中加热25 min，再放于冰水浴中15 min，取出。在490 nm处测定吸光度值，分别测得吸光度值为0.124，0.233，0.489，0.977，1.186。以葡萄糖对照品溶液的质量为横坐标，吸光度值为纵坐标，建立标准曲线。葡萄糖标准曲线回归方程为：Y=6.3289X+0.0037（r=0.9993），葡萄糖在0.0189 mg～0.189 mg之间线性关系良好。 　　2.2.8显色稳定性试验精密吸取供试品0.1 mL，按标注曲线步骤操作，将同一份反应液间隔一定时间（0.5、1、1.5、2、2.5、3 h）测定吸光度值，结果分别为0.330，0.342，0.326，0.332，0.329，0.338。计算RSD为0.6%，结果表明在3 h内显色稳定。 　　2.2.9精密度试验精密吸取葡萄糖对照品溶液0.1 mL，按标注曲线步骤操作，重复测定5次，记录吸光度值分别为0.128，0.129，0.125，0.131，0.130，RSD为0.2%。结果RSD3%，表明仪器精密度良好。 　　2.2.10重复性试验精密吸取供试品溶液0.1 mL，共5 份，按标注曲线步骤操作，测定吸光度