蛋白免疫印迹杂交手册概述.pdfVIP

蛋白免疫印迹杂交（Western Blot ）技术手册 蛋白免疫印迹杂交 （Western Blot WB ）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂 交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法。WB 是进行蛋白质分析最流行和 成熟的技术之一。本指南讨论 Western Blot 操作方法及常见问题分析，有助于成功完成 WB 。 A 蛋白样本提取制备 1 细胞或组织裂解 2 蛋白酶和磷酸酶抑制剂 3 蛋白定量 4 电泳上样样品的准备 B 电泳 1 PAGE 胶的制备 2 蛋白分子量 Marker 3 阳性对照 4 内参对照 5 上样与电泳 C 转膜与显色（Western Blot ） 1 胶中蛋白的检测 2 蛋白转膜 3 膜上蛋白的检测：丽春红 4 膜的封闭 5 一抗的孵育 6 二抗的孵育 7 显色 D 常见问题分析与解决方案 附录 1 WB 实验试剂配制方法 附录2 SDS胶的配制 WB 概述: 检测原理: