试验三、转氨酶活力测定汇编.pptVIP

* * 实验三、 氨基移换反应 －血液中转氨酶活力的测定 指在转氨酶催化下将?-氨基酸的氨基转给另一个?-酮酸，生成相应的?-酮酸和一种新的?-氨基酸的过程,也称氨基移换作用。 转氨作用 一．实验原理 血清中的谷-丙转氨酶，在37℃、pH7.4的条件下，可催化丙氨酸与α-酮戊二酸反应生成谷氨酸和丙酮酸 丙酮酸可与2,4二硝基苯肼发生加成反应，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，该产物在碱性环境中可转化成红棕色的苯腙硝醌化合物，其颜色的深浅与丙酮酸的生成量，亦即与谷丙转氨酶活性的高低成正比。通过标准曲线可以查出丙酮酸的生成量。 * 仪器 1. 5×15cm试管、刻度吸量管。 2. 恒温水浴、离心机、721型分光光度计。 * 试剂 1.0.1mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液 ⑴0.1mol/L磷酸氢二钠溶液 ⑵0.1mol/L磷酸二氢钾溶液 ⑶ 0.1mol/L pH7.4的磷酸盐缓冲液。 （两者以4：1体积比混合） 三、仪器与试剂 2. 标准丙酮酸（含丙酮酸2.0μmol/mL） 3.谷-丙转氨酶底物溶液 (含α-酮戊二酸2 μmol/ml及DL-丙氨酸200 μmol/ml) 4. 2.4二硝基苯肼溶液 (0.02%,1mol/L HCl溶液) 5. 0.4mol/L NaOH溶液 。 四、实验操作 1、标准曲线制作： 1）、取6支试管，分别标上0，1，