促性腺激素抑制激素对性腺,垂体的发育和维护.pptVIP

Gonadotropin-Inhibitory Hormone Inhibits GonadalDevelopment and Maintenance by DecreasingGonadotropin Synthesis and Release in Male Quail 雄性鹌鹑中促性腺激素抑制激素通过降低促性腺激素合成和释放来抑制性腺发育和维护 夏佳豪 作者：Takayoshi Ubuka, Kazuyoshi Ukena, Peter J. Sharp, George E. Bentley, and Kazuyoshi Tsutsui 通讯地址：Kazuyoshi Tsutsui，脑科学实验室，广岛大学综合艺术与科学学院，739-8521，东广岛，日本 1.研究背景 任何有关神经肽能够抑制促性腺激素的的分泌的说法没有得到证实，他们最近证明了在鹌鹑中一种新型的下丘脑十二肽能直接抑制促性县激素的释放，并命名它为GnIH,抑制促性腺激素释放的作用是以鹌鹑下丘脑中一种新型G蛋白偶联受体为媒介的。这个新的促性腺激素抑制系统被看作是鸟类的普遍特性，以一个完全新颖的观点，提供了一个前所未有的机遇来研究鸟类繁殖调控。为了了解GnIH在家禽生殖方面的作用，他们调查了GnIH在性腺发育和维护的作用。通过渗透泵给成熟的鸟类连续施加两周的GnIH,降低了促性腺激素共同α，LHβ亚基mRNA的表达。 PlasmaLH和睾酮浓度也降低。此外，给成熟鸟类施加GnIH会诱发睾丸中睾丸细胞的凋亡和降低生精活性。对不成熟的鸟类两周每天施加GnIH会抑制正常睾丸细胞的生长和血浆睾酮浓度的升高。幼年时蛻毛抑制也在给予GnIH后发生，这些结果暗示GnIH通过降低促性腺激素的合成和释放来抑制性腺发育和维护。GnIH也许能够解释在鹌鹑中下丘脑的GnRH可观察到降低之前光照能够诱发性腺的回归的现象。据他们所知，GnIH是首种被证明能抑制任何脊椎动物生殖功能的一种下丘脑神经肽。 2.目的及意义 ●为了阐示GnIH作用模式。 ●GnIH功能性意义和它作为一种涉及到家禽生殖关键神经肽的潜在功能。 ●为了调查GnIH是否抑制睾丸细胞的发育与维护。 3.材料和方法 动物：成熟和未成熟的雄性日本鹌鹑。新孵出的鹌鹑被放置在一个温度控制室(35±2℃)日常16小时光照和8小时黑暗(开灯700小时)育雏第一周。温度以每周下降3.5 ℃的梯度到第四周，将鹌鹑分离到单独的笼子。所有的鸟类提供鹌鹑食物和自来水。 实验计划:为了确定GnIH合成和分泌的影响，利用小型渗透泵把GnIH施加给三个月大的成熟个体，用三个不用的剂量(0.03,0.3,3微克GnIH在0.5微升0.9%的生理盐水中/h,每组七只），对照组用相同的渗透泵摄入生理盐水。每个渗透泵在戊巴比妥钠（40mg/kg)下植入ip（趋化因子干扰素诱导蛋白），在连续两周的施加GnIH后，所有鸟类在1400至1600小时之间通过去头终止生命活动，血液收集在肝素化中并在4℃离心20min，血浆保存在20 ℃，立即收集血液后去除垂体，将其速冻，保存在-80℃中。促性性腺激素common α，LHβ和FSHβ亚基mRNA在垂体表达用竞争性PCR量化。PlasmaLH和睾酮浓度用RIA量化。 为了调查GnIH在睾丸发育方面的影响，向不成熟的鹌鹑（每组8只)注射三种不同剂量的GnIH，从8-20日龄开始在1400-1600小时之间每天一次，因为不成熟鹌鹑体型较小，注射用小型渗透泵。它们在实验过程中，平均体重由17.1g增至56.8g。将GnIH剂量由5.8ng每天降至1.8ng每天/g（体重）。对照组仅提供生理盐水。所有的鹌鹑在1400-1600小时之间，在第二十一天的时候通过去头收集血液和睾丸，血液收集后，移除睾丸，称重，浸泡在Bouin氏固定液里两天。随后脱水嵌入石蜡，切成6微米小段苏木-伊红染色用于组织学检查，血浆睾酮浓度用RIA量化。 为了调查GnIH睾丸细胞凋亡和生精活动的影响，用渗透泵给成熟的鸟类施加GnIH(0.3微克/h)两周。在1400-1600小时之间将其麻醉并且在用完4%多聚醛的固定液后用PBS灌流。去除睾丸存于固定液两天，然后脱水嵌入石蜡。切成6微米的小段，通过末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记检测凋亡细胞，睾丸的形态通过苏木-伊红染色调查。 最后为了了解GnIH家禽生殖的生理作用，我们分析了GnIH在幼年蛻毛到成熟时成年蛻毛的影响，GnIH被注射入未成熟鸟类，以三种不同的剂量（0.01,0.1,1微克在100微升0.9%的生理盐水中）每天一次，每组8只，8-20日龄，1400-1600小时之间，对照组仅提供生理盐水。 4.结果分析 成年时GnIH对促性腺激素合成和释放的作用