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选修三 专题1 基因工程讲义 张兴普 2016.02.06 第一节 基因工程的原理 基因工程：指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物新的遗传性状，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在DNA分子水平上进行的设计和施工，因此又叫DNA重组技术。 理解定义掌握以下几点： 是一种按照人们的愿望，定向改变生物遗传特性的技术→定向变异 分子水平的操作 原理：体外进行的人为的物种间的基因重组。 一旦成功，便可遗传→可遗传变异 主要技术为体外DNA重组和转基因技术 对基因工程的理性思考：正面：提高农作物抗逆性改良农作物品质 负面：转基因生物的安全危机对生态环境的破坏 几种现代生物技术的比较 基因工程 DNA分子水平的操作：DNA重组、转基因、基因探针检测等 蛋白质工程 通过基因修饰或基因合成，改造天然蛋白质或创造自然界不存在的蛋白质 细胞工程 细胞或者细胞器水平的操作：细胞融合、细胞杂交、细胞拆合等 胚胎工程 针对动物早期胚胎和配子的操作：胚胎移植、体外受精等 基因工程的工具：工具酶(限制酶和DNA连接酶)和运载体 限制酶：—“分子手术刀”“基因工程的剪刀” （1）、来源：主要从原核生物中分离纯化 （2）、在原核细胞自身的作用：是一种防御性工具，可切断外来入侵的外源DNA，以确保自身安全 （3）、在基因工程中的作用：识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列且使每一条 特定的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，从而切断DNA分子 （4）、作用部位：（切断两个）磷酸二酯键 （5）、识别的序列：大多数由6个核苷酸组成，少数由4、5、8个，从5’读向3’端 （6）、识别的序列的特点：以中轴线呈中心对称 （7）、切割结果： ①从中轴线两侧切，形成黏性末端 例如：EcoRⅠ限制酶： -GAATTC- EcoRⅠ限制酶 -G AATTC- -CTTAAG- -CTTAA G- ②从中轴线切，形成平末端 例如：SmaⅠ限制酶： -CCCGGG- SmaⅠ限制酶 -CCC GGG- -GGGCCC- -GGG CCC- 2、DNA连接酶—“针线”“缝合针” （1）、在基因工程中的作用：拼接切下来的DNA片段，恢复磷酸二酯键。 （2）、根据来源不同分类： ①E.coliDNA连接酶 连接 黏性末端 ②T4DNA连接酶 连接 黏性末端和平末端（但连接平末端效率低） （3）、DNA连接酶和DNA聚合酶的比较 相同点：化学本质都是蛋白质，作用都是形成磷酸二酯键。 不同点：①DNA聚合酶在DNA复制时发挥催化作用，而DNA连接酶在连接DNA片 段时发挥催化作用 ②DNA聚合酶是将单个的脱氧核苷酸加在正新合成的DNA子链的3’末端游离的-OH 末端，脱水缩合形成n-2个磷酸二酯键；DNA连接酶是在俩个片段DNA的两个缺口形成 2个磷酸二酯键。 ③DNA聚合酶是以亲代DNA的每一条链为模板，DNA连接酶不需要模板。 图示：DNA聚合酶: DNA模板 3’ 5’ 新合成的子链 5’ 引物 - OH 3’+单体 合成方向 DNA模板 5’ 3’ 新合成的子链 单体+ 3’HO- 引物5’ 合成方向 DNA连接酶： 在两个缺口处形成2个磷酸二酯键 （4） 反转录酶 组成 核心步骤