实验五矿质元素缺乏症状的观察及光合特征的测定.pptVIP

实验五  矿质元素缺乏症状的观察及光合特征的测定（2）? 植物形态特征的变化是由于生理变化引起的，而且总是落后于生理变化，因此将叶片光合色素的含量、净光合速率等生理指标的测定与形态观察相结合来研究植物缺素症，能更全面地反应在不同缺素条件下植物的生长状况。 【实验内容】 叶片净光合速率的测定 光合色素的提取分离和含量测定及理化性质的观察 光合色素的提取和含量的测定 荧光现象的观察 光合色素的分离 叶黄素和叶绿素的分离 胡萝卜素的分离 用氢离子和铜离子取代叶绿素中的镁离子 叶片净光合速率的测定 采用LI-6400光合测定系统来测定完全培养和缺素培养后叶片的净光合速率等指标。本实验在开路系统下进行测定。 净光合速率是单位时间内光合作用减去呼吸作用的差值。 光合速率以每秒每平方米叶面积吸收二氧化碳的微摩尔数表示。 Li-6400记录的参数 PAR (μmol/m2/s): 光合有效辐射 （100-1800） CO2 int (ppm)：细胞间隙CO2 浓度 P (μmol/m2/s) ：净光合速率 E(mmol/m2/s) ：蒸腾速率 C(mmol/m2/s) ：气孔导度 （气孔开度） Rate (lpm)：空气流速 （0.5 lpm） TA (℃) : 叶室空气温度 Hr(%) ：相对湿度 CO2o (ppm)：当前叶室出气口CO2 浓度 CO2i (ppm)：当前叶室进气口CO2 浓度 光合色素的提取分离和含量测定及理化性质的观察 光合色素的提取 1.精确称取完全培养和缺素培养 (一组即可) 的叶片各0.05g左右, 剪碎研钵（用约2ml 95％乙醇），过滤到干燥的10或者25ml锥形瓶中。 2.再加入少量95％乙醇继续研磨提取，直到绿色消失为止。最后定容到刻度备用. 光合色素含量的测定 光合色素含量的计算公式如下： Ca ＝ 12.7A665-2.69A649 Cb = 22.9A649-4.68A665 Ca+b = 20.2A649+8.02A665 Ck = 4.7A440-0.27CA+B Ca、Cb、Ca+b、Ck分别为叶绿素a、叶绿素b、叶绿素a+b、类胡萝卜素的浓度(μg/mL)，A663、 A645、 A440分别为665nm、649nm 、440nm处的吸光度值。 叶绿素含量的计算 根据得到的叶绿素含量，分别计算叶绿素a、叶绿素b、叶绿素a+b、类胡萝卜素的含量（单位：μg/g，也可通过单位换算，将单位变为：mg/g） 叶绿素a含量＝Ca×V/W 叶绿素b含量＝Cb×V/W 叶绿素（a+b）含量＝Ca+b×V/W 类胡萝卜素含量＝Ck×V/W 式中，V：提取叶绿素的总体积（mL）；W：植物材料的鲜重（g）。 荧光现象的观察 将叶绿素提取液置于光下，观察其反射光的颜色。 荧光的定义：伴随着激发态分子自发地衰减并回到基态所发出的光称为荧光。 正确的观测结果为：叶绿素溶液的透射光呈绿色，反射光呈红色。 光合色素的分离 叶黄素和叶绿素的分离 取3mL提取液于试管中，加等量的石油醚振荡成乳浊分层 (如分层不明显，可再加少量)，因叶绿素与胡萝卜素易溶于石油醚，所以上层为绿色、下层为叶黄素，把乙醇染成黄色，如果分层不明显，可加1～2滴水。 胡萝卜素的分离 取3mL提取液于试管中，加1mL 20％NaOH乙醇溶液，摇匀后，放在水浴上煮沸，冷却后，加入3mL石油醚，振荡并分层，上层为黄色的胡萝卜素，下层为叶绿酸的钠盐和叶黄素。 氢、铜取代反应 取5ml提取液于试管中，加1—2滴10％HCl，由于氢离子取代了叶绿素分子中的镁离子生成褐色的黑籽酸，然后在黑子酸中加入少量醋酸铜晶体，在水浴上加热，溶液由褐色转变成暗绿色，铜离子又取代了黑籽酸中的氢离子。 【思考与作业】 描述各种元素的缺素症，包括最早出现的部位、根生长情况、叶片颜色的变化等现象，并分析产生这些不同症状的可能原因。 你观察到的荧光是什么颜色？其颜色和光强度及叶绿素提取液浓度有关系吗？为什么？ 比较缺素培养和完全培养的叶片净光合速率和叶绿素含量的差异,试解释可能的原因? * * 植物生物学实验-植物生理部分