乙型脑炎病毒C蛋白编码基因重组质粒构建与表达.pdf

山西医药杂志2013年 1月第42卷第 1期上半月 ShanxiMedJ，January2013，Vo1．42，No．1theFirst 0 ／ ‘ 著 · 乙型脑炎病毒C蛋白编码基因重组质粒构建与表达 中国医科大学附属盛京医院(11OOO4) 翟永贞 王志峰 冯国和 【摘 要】 目的 构建流行性乙型脑炎病毒 (JEV)C蛋 白编码基因重组子并鉴定。方法 以JEvSA14—14— 2株总 RNA为模板 ，应用反转录一聚合酶链反应 (RT-PCR)方法扩增 JEVc蛋 白编码基 因，克隆至 pMD19一T Simple载体测序。为便于分析JEVC蛋 白编码基因重组子在哺乳动物细胞中的表达，在JEVc蛋 白编码基因5 端附加 FLAG序列，并亚克隆至 pcDNA3．1(+)载体中，构建重组子 pJe并经酶切及DNA测序分析。脂质体法 将 pJc转染中华仓 鼠卵巢(CHO)细胞。免疫荧光检测转染 的CHO细胞中JEVC蛋 白分布与表达。结果 pJC 经 BamHI／EcoRI酶切释出的插入子片段 (414bp)分别与预期结果相符合。所编码的融合蛋 白主要分布于胞 质，少量分布于胞膜。结论 pJC成功构建，转染的CHO细胞可表达 JEVC蛋 白。 【关键词】 脑炎病毒 ，日本 ； 病毒蛋 白质类 ； 蛋 白质 C； CHO细胞 Constructionand expression ofrecombinantencoding C protein derived from Japaneseencephalitisvirus ZHAI Yong—zhen，WANG Zhi—feng，FENGGuo—he．ShengJingHospitalofChinaMedicalUniversity Shenyang 110004．China [Abstract] 0bjective ToconstructandexpresstherecombinantencodingCproteinderivedfromJapanese encephalitisvirus(JEV)．Methods GeneencodingCwasamplifiedbyRT—PCRtechniquefrom JEV SA14—14—2 straintotalRNA．JEV CproteingenewasobtainedwithrestrictionendonucleaseBamH I／EcoR Ifrom thepro— karyoticexpressionvectornamedafterpMD19一T simple，and subclonedintopcDNA3．1(+ )eukaryoticvector， namedafterpJC．TherecombinantwasconfirmedbyrestrictionenzymesanalysisandDNA sequencing，thenwas transfectedintoChinahamsterovary (CH0)cellsbyLipofectamine2000．Distribution and expression oftheC proteinencodedbypJC intransfecdCH0 cellsweredetectedbyimmunofluorescence．Results DNA fragments (414bps)oftheinsertsreleasedfrom pJCwithBamHI／EcoRIrestrictionendonucleaseweretheexpectedtheoretic results．TheexpressionofaboveC proteinwasmainlydistributedin endochylemaoftransfected CHO cells，and notmuchinmembraneoftransfectedCHOcells．Conclusion Thereco