乙酰胆碱酯酶传感针的研制.pdf

乙酰胆碱酯酶传感针的研制 胡文慧马长清陈胜利 任霞任恕 华中科技大学同济医学院武汉 摘要：本文剁备了以三辛胺为中性载体制成PVC涂丝膜pH针型电极，并将乙酰胆碱酯酶(Ac旺) 用吸附交联法固定制成传感器．pH电极响应的线性范围为3—11，测量了传感器对氯化乙酰胆碱在 200 u u g／mL一1500g／mL范围的响应曲线，响应时间小于2rnin． 关键词：pH电极乙酰胆碱酯酶Ache酶电极传感针 用于检测农药残留的乙酰胆碱酯酶传感器时有报导‘1，21，多采用双酶系统，检测H202的氧化电流来 检测。本文采用以三辛胺为中性载体制成PVC涂丝膜pH电极为基体电极，并将Ache用壳聚糖固定制 成酶膜，涂复在电极膜表面，制成性能良好的乙酰胆碱酯酶电极，且在对水体的甲胺磷检测中取得较好 的结果。 实验部分 1．主要仪器与试剂 汞电极，江苏电分析仪器厂；漩涡震荡器，麒麟医仪；红外灯照射仪，自制；提膜机，自制，SYZ．B型石英 亚沸高纯水仪，江苏宜兴勤华石英玻璃仪器厂。 三辛胺，大连油脂化学厂；PVB，青岛胶南树脂厂；四氢呋喃，四苯硼钠，中国医药(集团)上海化学试 剂厂；邻苯二甲酸二异辛酯，北京福星化工厂；铂丝，中国医药(集团)上海化学试剂厂；壳聚糖，sigma公 化乙酰胆碱，上海三爱试剂公司。其余试剂均为分析纯。 2．PVC膜pH传感针的制备 将一定长度铂丝固定于拉制的毛细玻璃管内，尖端露出，剪切平整，密封绝缘，再套如入不锈钢管以加 强硬度。按一定比例称取四苯硼钠，三辛胺，PVC，邻苯二甲酸二异辛酯，用四氢呋喃溶解至IMl，再用漩 涡振荡器震荡混匀。将上述处理的铂丝尖端清洗干净后，竖直固定在提膜机上，用微量进样器滴一定量敏感 膜溶液于纯净水水面，铂丝尖端插入其中再迅速提起，便于尖端形成单层薄膜，再将针放入110℃恒温箱烘 烤50min，取出后再重复一次上述操作便制成pH传感针。 3．AchE电极的制备 将1％浓度的壳聚糖液涂附于上述pH传感针敏感膜表面，红 外灯下20min烤干，于l％NaOH中浸泡10m／n成膜，于纯净水中 溶涨30min取出。称取BSA0．1759，溶于O．825mLpH7．2的 2／15mol／LKH2P04-NazHP04缓冲溶液中，用微量进样器取9uL Ache溶液和15UIBSA置于5mL离心管中，用离心机混和。将镀 圈1 AchE电极图 了壳聚糖膜的针置于混合液中4c1虱定5h，加入一定量2．5％的戊 1·外套不锈钢管；2·玻璃毛细管3·铂丝； 二醛溶液于上述混合液中使终浓度为0．625％，继续交联反应3h， 4·敏感膜(从内到外为PH膜，酶膜) 取出，用纯净水冲洗，于4℃冰箱pH7．2缓冲液中保存。 366 4．电极电位测量 4．1 H传感针的电位测量 节得到pH为2—13的试液，并用玻璃复合电极校正。以SCE为参比电极，在室温及恒速搅拌条件下测量 pH传感针的响应。 4．2 AchE电极电位测量 在pH8．2的缓冲液为底液，以SCE为参比电极，恒速搅拌下，将电极清洗至空白电位，加入一定浓度 、 结果与讨论 1．基础pH传感针响应特征 o．m。电极的稳定性及重现性均 合溶液法分别测定了对Na+，C，Ca¨，Nrr离子的电位选择系数，均小于1 良好。不同活度溶液中电动势漂移2．3mV／h，一周内读数变化不大。 2．AchE电极电位响应特征 试验了不同乙酰胆碱浓度下电极的动力学响应。乙酰胆碱浓度增大，响应速率随之增大，继续增大浓度 时，反应速率不再增大j继而有下降趋势。这是由于较高浓度的乙酰胆碱对乙酰胆碱酯酶的抑制作用所致