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中国医科大学 硕士学位论文 人视网膜色素上皮细胞吞噬过程中细胞内钙离子浓度的变化 姓名：安刚 申请学位级别：硕士 专业：眼科学 指导教师：洪晶 中文摘要 目 的 视网膜色素上皮(RPE)细胞具有复杂的结构和特殊的生理功能。它的 吞噬功能对维持正常的视觉至关重要。该功能障碍时引起视细胞外节膜盘 的堆积而导致严重的视网膜变性。国内外学者已经证实视网膜变性性疾病 RPE细胞特异性吞噬功能障碍而非特异性吞噬功能正常，但其机理未得到 阐明，进一步探讨吞噬功能及其机制，将对这类疾病的预防和治疗带来希 望。目前虽已知RPE细胞的特异性吞噬功能涉及腺体一受体相互作用，启 动跨膜信号传导系统；但是关于跨膜信号传导系统在RPE细胞的特异性吞 噬过程中所起的作用仍不十分清楚。 为此我们选择信号传导通路中的一个信使分子钙离子作为研究对象。 l屯tinjtl 通过采取体外培养人视网膜色素上皮细胞(humanpigmentepitheli— am，HReE)，动态检测人视网膜色素上皮细胞特异性及非特异性吞噬过程 中ca“浓度变化，明确ca“在HRPE的吞噬功能中所起的作用。 材料与方法 1．材料来源：取自中国医科大学附属一院眼科角膜术后的正常眼球，眼 球供体年龄限制在24—36岁。 2．RPE细胞的培养及标记。采用胰蛋白酶消化法。 3．ROS的提取和人RPE细胞色素颗粒的制备。用细胞培养液调整浓 度至107lnl～。 X 4．RPE细胞吞噬模型的制备。把1 107ml一视杆细胞外节膜盘(rod outer 胞，在孵育的不同时间(5min一24h)终止吞噬反应。用双重荧光标记法检 测HRPE细胞吞噬动力学。 5．细胞内钙离子浓度的检测：用荧光显微镜Fluo-3荧光负荷技术联合 冷CCD计算机成像分析系统检测相应时问点的HRPE细胞特异性及非特 异性吞噬时的Ca“浓度。 ·1． 结 果 细胞表面，1．5h色素颗粒才结合于RPE细胞表面。 高的峰，并在吞噬过程中一直维持高峰。经统计学检验与静息状态下的钙 离子浓度有明显差异(P0．05)。 3．非特异性吞噬组(色素颗粒组)：在非特异性吞噬过程中细胞胞浆内 钙离子未有明显变化，经统计学检验与静息状态下的钙离子浓度无明显差 异(P0．05)。 结 论 1．HRPE细胞特异性吞噬过程中结合及吞入的启动早于非特异性吞 噬。 2．Ca2+参与特异性吞噬过程，对吞入过程的维持十分重要，但不参与 HRPE细胞非特异性吞噬的直接调节。说明特异性吞噬与非特异性吞噬在 信号传导方面有着明显的不同。 关键词：视网膜色索上皮细胞；吞噬；钙离子 ·2· in the alterationoftheconomtratiomofcaldmm The phagocytic