VBNC进展汇报答案.pptx

细菌活的非可培养（VBNC）状态及其机理研究进展 汇报人：刘辉 目录 1 细菌VBNC状态的发现与现状 2 细菌VBNC状态的诱导因素 3 VBNC状态细菌的生物学特性 目录 4 VBNC状态细菌的检测 5 细菌VBNC状态形成的机制研究进展 1 细菌VBNC状态的发现与现状 现状 2 细菌VBNC状态的诱导因素 化学因素：食品消毒剂（次氯酸钠、酒精）、防腐剂（如苯甲酸、山梨酸和丙酸等） 物理因素：温度、pH值波动、紫外线照射、及一些用于灭菌的方法（如巴氏灭菌处理），均可导致细菌进入VBNC状态 细菌VBNC状态的诱导，既可以是单因素所致，也可以是多种环境因素综合作用的结果。但是起主导作用的因子对不同的细菌存在不一致。如Vattakaven等(2006)发现寡营养在诱导vibrio shiloh进入VBNC状态的过程中发挥主要作用。而对vibrio vulnificus 来说，低温是使其进入VBNC的主要诱导因素。 不同的微生物，同一种诱导因素使它们进入VBNC状态的时间通常是不同的。如同样条件下（寡营养结合20 ℃, K tasmaniensis需要157天才能进入VBNC状态,而K. shiloi只需126天就能进入VBNC状态(Vattakavenetal.,2006)。 2 细菌VBNC状态的诱导因素 而对于同一种微生物来说,不同的诱导因素使其进入VBNC状态的时间通常也是不同的。如在酸度为0.1% ( pH = 2.94) 时，金黄色葡萄球菌6 d 后进入VBNC状态，在45 ℃高温处理，只需74 h即可 （余以刚等2013）。 形态：细菌进入VBNC状态后体积会变小,如由弧形、杆状变成球状、表面产生许多小泡等。这将扩大表面积与体积之比,有助于提高VBNC状态细菌对营养物质的吸收,从而提高VBNC状态细菌的存活能力。 3 VBNC状态细菌的生物学特性 3 VBNC状态细菌的生物学特性 生理代谢：生理代谢的变化主要表现为物质运输能力降低、呼吸速率下降、大分子物质的合成量减少、核糖体及核酸物质的密度明显降低等。但氨基酸的吸收仍在进行,并且生物合成也没有停止,仍然有基因表达变化和新的逆境蛋白在合成。 细胞壁和细胞膜：细菌菌体进入 VBNC 状态后细胞壁肽聚糖单体物减少，寡聚物增多，交联桥的数量增加，抵抗外界机械损伤的能力大幅度的提高。 细胞膜上的短链脂肪酸含量显著增加，增强了细胞膜的流动性，以助于提高VBNC状态细菌对营养物质的吸收 。 3 VBNC状态细菌的生物学特性 致病性：细菌进入VBNC状态后致病基因仍有少量的的表达，且VBNC状态细菌具有复苏能力，仍然具有致病性。因此处于VBNC状态的致病菌应引起高度重视。 4 VBNC状态细菌的检测 如何检测VBNC 4 VBNC状态细菌的检测 这种方法是依靠荧光染料来区分死活菌，主要是利用一些荧光染料对细胞膜的透性不同这一特征。有些荧光染料能透过完整的及受损的细胞膜,如SYTO9、SYBR-Green I ，而有些荧光染料仅能通过受损的细胞膜,如EB、PI等。这样，将具有不同细胞膜透性能力的染料相结合就可以区分出死菌与活菌，再结合荧光显微镜或流式细胞仪的检测就能得出活菌的数量 4 VBNC状态细菌的检测 具有代谢活性这一特征是“活菌”的判定标准，因此就发展起来了基于多种细胞代谢活性的“活菌”检测方法，包括基于底物吸收能力的DVC活菌直接计数法及基于氧化还原能力的INT呼吸检测法。 4 VBNC状态细菌的检测 RT-PCR是以mRNA为扩增对象的一种PCR技术，此可以作为检测活菌的特异性及敏感性很高的方法，而且可以与定量PCR技术相结合而对所检测的mRNA进行定量，进而实现对活菌的计数。如果找到合适的参考基因还可以实现对混合细胞(VBNC状态细胞、可培养细胞、死细胞)中活细胞的定量。 4 VBNC状态细菌的检测 近几年，许多学者都致力于生物传感器的研究，即用核酸生物识别VBNC菌。最近的重大进步是两种以DNA为基础的生物传感器，即靶基因传感器和受体基因传感器。有关这方面的研究较少，仍需进一步验证。 对VBNC状态形成机制的研究，可为有效杀灭VBNC状态细菌提供理论依据。但目前对VBNC状态微生物的研究多集中于生物学特性方面，而有关其形成机制的研究还很缺乏。 5 细菌VBNC状态形成的机制研究进展 5 细菌VBNC状态形成的机制研究进展 5 细菌VBNC状态形成的机制研究进展 5 细菌VBNC状态形成的机制研究进展 5 细菌VBNC状态形成的机制研究进展 5 细菌VBNC状态形成的机制研究进展 Thanks for your attention