第43讲生物化学与分子生物学技术实践.doc

第43讲　生物化学与分子生物学技术实践 [考纲要求]　1.蛋白质的提取和分离。2.PCR技术的基本操作和应用。3.从生物材料中提取某些特定的成分。 考点一　生物技术实践——蛋白质的分离与纯化 1．纯化原理 蛋白质之间以及蛋白质与其他物质之间在分子大小、溶解度、所带电荷的多少、吸附性质等方面存在差异。 2．纯化方法 (1)透析法 ①原理：蛋白质水溶液具有亲水胶体溶液性质，不能透过半透膜。 ②目的：去除小分子化合物杂质，如无机盐、单糖、双糖、氨基酸等。 ③常用的半透膜：肠衣、玻璃纸。 ④步骤：将待纯化的蛋白质溶液装入透析袋内，再把透析袋放入透析液中即可。 (2)离心法 ①原理：在离心力的作用下，分子大小、密度不同的分子沉降速度不同，从而被分离。 ②目的：使分子大小、密度不同的不同种类的蛋白质彼此分离。 (3)电泳 ①概念：带电颗粒在电场作用下向着与其电性相反的电极移动的现象。 ②原理：不同的物质所带电荷不同，颗粒的大小、形状不同，因此，在电场中的泳动速度不同。 ③影响泳动的因素：带电颗粒的性质，即颗粒的大小、形状和所带净电荷的多少；此外还有电场强度、溶液的pH等因素。 ④泳动特点：带电颗粒直径越小，越接近于球形，所带净电荷越多，则在电场中的泳动速度越快；反之，则越慢。 ⑤支持物：滤纸、醋酸纤维薄膜、大分子凝胶等。 易错警示　(1)注意：透析时间为12 h。透析袋是用硝酸纤维素