“电子”cDNA文库筛选指导基因的全长cDNA克隆.pdfVIP

20口 ．1『cI) ’ 斗 技 术 通 讯 ⅡT唧 BI~ OLOGY Vo1．11 No．1 Mar．21300 “电子”cDNA文库筛选指导基因的全长cDNA克隆 宅 塑塑垂 张开泰 吴德昌， 了 5 (军事医学科学院放射医学研究所 北京 100850) 摘要 “电子”eDNA文库筛选主要是指通过采用生物信息学的方法延伸表达序列标签(EST)序列， 以获得基因的部分乃至垒长cDNA序列，避免或部分避免构建与筛选eDNA文库等烦琐的实验室工 作。该方法具体体现了EST数据库的迅速扩张已导致识别与克隆新基目的策略发生革命性的变 化。EST序列ZA73为本实验室克隆到的可能参与辐射致气管上皮细胞恶性转化过程的基因片段， 本研究采用“电子”eDNA文库筛选的方法对其可能的垒基因序列作了预测。 关键词“电 ： 查生堕兰；表达序列标签；电离辐射；基因 皇熏J刁 ．}sT 蔓目 隍 Electronic cDNA library screening directs the full—Iel瞎蕾lI eDNA doni~ of a gem Li Gang,Hu Yingehun，Zhang Kahai，Wu DE她 (Laboratory Mo／etn／ar Tox／oo／ogy，lnmtute edlddoff~／lMed／x／ns，＆咖 100850) Almtraet Electronic eDNAlibrary screeningmainly refersto~meding ESTs sequenceto get ranch of a gene usi,~biomfommtics methods，byP日s8iIlg much of the lab-work of nmking and鲫 n；ng li ry．The,~ne,gir,g of electronic eDNA lil蚰w scre即in异indicates that the remarkabk expansion of EST efforts has led to a revolu— tionary eha,~ inthe strategiesforidenti研rig and c】oniJ1g novelgenes．ZA73is a geneflllgment cloned by our laboratory whichmay beinvolvedthe neoplastictransformationof rattracheal epithelial cellsinduced by Fadla- tlon，In this study，the potential nearly full gene sequence of ZA73 w船 predicted u ng electronic eDNA li· brary screeningmethod． Keywords electronic eDNAlibrary s~reeningl 甲ressed sequerH)eta挚；i0|l radiation；gene 在通过mRNA差异显示、代表性差异分析等方 SV40转染的人胚肺纤维母细胞、SV40转染的人支 法获得未知基因的eDNA部分序列后，研究者都迫 气管上皮细胞以及云锡矿矿工肺癌为模型，克隆到 切希望迅速克隆到其全长eDNA序列，以便对该基 30余个可能与辐射致癌相关的eDNA片段。其中克 因的功能进行研究。克隆全长eDNA序列的传统途 隆ZA73(GenBank登录号：AF011363)_2 为采用此方 径是采用克隆(噬斑)原位杂交的方法筛选eDNA文 法克隆到的在恶性转化的RTE细胞中高表达的新 库，或采用PCR的方法。但在开始采用实验的途径 基因片段，本研究采用“电子”eDNA文库筛选的方