北京鸭胆囊收缩素cDNA克隆与序列分析.pdfVIP

实验研究 。143· 北京鸭胆囊收缩素eDNA克隆与序列分析 董虹1，张永东1，刘凤华2，许剑琴1 (1．中国农业大学动物医学院，北京100094，2．北京农学院动科系) 计了一对特异性引物，从鸭腺胃、十二指肠和空肠提取总RNA，通过反转录一聚合酶链反应 大肠杆茼JMl09，阳性克隆经双酶切鉴定后，进行测序和序列分析。结果腺胃未能扩增到目的 片断，其它两组织都扩增到长度为220bp，编码胆囊收缩素的cDNA。与鸡的胆囊收缩素核苷 酸序列相比较，同源性为88．6％。 关键词：鸭胆囊收缩素；eDNA克隆序列；北京鸭 胆囊收缩素(CholeeystokininCCK)是由胃肠化试剂盒为上海华舜生物工程有限公司产品。总 黏膜I细胞分泌、33个氨基酸组成的多肽类激 RNA小量提取试剂盒和胶回收试剂盒为博大泰 素。具有收缩胆囊和刺激胰酶分泌，促进胃酸、胰 克产品。 液的分泌，增强胰酶活性，刺激胃肠平滑肌收缩， 1．3引物的设计 促进远端十二指肠和空肠的蠕动及降低食物消 化、延缓胃排空等功能…。脾为“后天之本”，具 A1vrGAT 设计了一对引物。上游引物：5，ATT 有运化水谷精微，运化水湿的功能。脾失健运。则 AGCTCCCAGGAC AGT一3，；下游引物：5’一GAG 消化吸收功能失职。出现一系列与消化障碍有关 GTGGCTCAGCAGTTC ATC一3，．引由上海生工 的疾病。研究显示旧1。脾虚不同阶段胆囊收缩素 生物技术服务有限公司合成。 分泌不同，提示CCK可做为脾虚证的一个客观性 和特异性指标。本试验运用RT—PCR技术成功 及eDNA第一条链的合成 地克隆了北京鸭CCK基因片断，不仅为进一步研 30日龄北京鸭颈动脉放血，取腺胃、空肠和 究鸭CCK基因的全序列及其在鸭体内的分布奠 十二指肠，液氮速冻，采用博大泰克公司总RNA 定基础，同时也为从分子水平探讨脾虚与CCK之 提取试剂盒，分别取组织50rag，加入玻璃研磨器 间关系，进一步探究健脾消食中药促进动物生长 中，吸入预冷的变性剂，冰浴研磨至无明显组织 的机理奠定基础。 块，醋酸钠溶解分离，酚一氯仿一异戊醇抽提，异 1材料与方法 丙醇沉淀，适量双蒸水溶解总RNA，用微量核酸 1．1试验动物 mM 蛋白检测仪测定RNA浓度，取RNA20,g，10 30日龄健康北京鸭，颈动脉放血后采腺胃、 空肠和十二指肠，液氮速冻，一80℃保存备用。 转录酶，25仙l反应体系中合成第一条链。 1．2工具酶和试剂 1．5北京鸭CCKeDNA部分片段的扩增 JMl09、pGEM—TEasyVector试剂盒、EcoR eDNA为模板， 501上1反应体系中