2.高效液相色谱仪及固定相-流动相.pptVIP

仪器分析课程讲义 第四节 高效液相色谱仪 目录 一、输液系统 1．贮液器 贮液罐的材料应耐腐蚀，对溶剂呈惰性，容积约为0．5—2．0L； 贮液罐放置要高于泵体； 使用过程贮液罐应密闭； 溶剂在放入贮液罐之前必须经过0．45um滤膜过滤。 2．脱气装置 作用：脱去流动相中的溶解气体。 (1)吹氮脱气法 (2)加热回流法 (3)抽真空脱气法 (4)超声波脱气法 (5)在线真空脱气法(on—1ine degasser) 三、高效分离柱 色谱柱是实现分离的核心部件。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。 常规液相色谱柱 1～6 mm，10～50 cm。 微孔填充柱 0.5-1mm 毛细管柱 30-50μm 装柱方法：有干法和湿法，按粒度20μm划分。 柱温控制 下列几种情况需要控制柱温： 法定标准分析方法中，要求保留时间具有再现性； 必须通过改变柱温来提高分离效率； 对高分子化合物或黏度大的样品； 对一些具有生物活性的生物分子； 对一些组成复杂的样品，使用二维色谱技术。 特点： 灵敏度高，可达10-9g.mL-1； 线性范围高； 可用梯度洗脱； 对流动相的流速和温度变化不敏感； 不适用于对紫外不吸收的试样； 紫外光不透过的溶剂不能用（苯等）。 特点： 通用型检测器 ;灵敏度低（10-7g.mL-1），不能用于痕量分析; 对温度敏感，要求使用温度恒定; 对流动相流量变化敏感，不能用于梯度洗脱。 高灵敏度(比紫外检测器高两个数量级，达10-11g.ml-1) 高选择性; 线性范围窄； 测量中不能使用抑制、吸收荧光的溶剂； 对不产生荧光的物质，可使其转变成荧光物质； 广泛应用于生物化工、制药、食品和环境监测中. 5. 电导检测器（electrical conductivity detector） 属电化学检测器，是离子色谱法中应用最为广泛的检测器 作用原理：根据物质在某些介质中电离后所产生的电导变化来测定电离物质的含量。 （2）表面多孔型(薄壳型微珠) 30～40μm的玻璃微球，表面附着一层厚度为1 ～ 2μm的多孔硅胶。 表面积小，传质速度快，但柱容量低； 2.液-固吸附固定相 极性：硅胶、氧化镁、分子筛 等； 非极型：高聚物微球、石墨化碳黑、聚合物包裹固定相。 结构类型：全多孔型和薄壳型； 粒度：5～10 μm； 3.液-液色谱固定相 惰性载体：硅胶，无机氧化物、高分子聚合物、脲醛树脂等，多为3—10um的全多孔微球。 固定液：正相： 氰基柱、胺基柱等 反相 : 烷基柱、苯基柱。 2. 流动相类别 按流动相组成分：单组分和多组分； 按极性分：极性、弱极性、非极性； 按使用方式分：固定组成淋洗和梯度淋洗 4 梯度洗脱 梯度洗脱，与气相色谱中的程序升温一样，可极大地改善分离效果 在分离过程中按照一定的程序连续改变载液中溶剂的配比和极性，通过载液中极性的变化来改变被分离组分的分离因素。 通过梯度洗脱，可缩短分离时间、提高分辨能力、改善峰形，还可提高分析精度。 溶剂的组成在15min内，从10％（V/V）CH3CN-H2O随时间改变至50％CH3CN-H2O 讨论1 用ODS柱分析一有机弱酸混合物样品，以某一比例甲醇-水为流动相时，样品容量因子较小，若想使容量因子增加，较好的办法是 A 增加流动相中甲醇的比例 B增加流动相中水的比例 C流动相中加入少量HAc D流动相中加入少量的氨水 讨论2 在反相色谱法中，若以甲醇-水为流动相，增加甲醇的比例时，组分的容量因子k与保留时间tR如何变化？ 作业 1.在ODS柱上，以甲醇为流动相，某组分的分配容量k=1.2,如以乙腈为流动相，其k值是增加还是减少，为什么？ 2.在硅胶柱上，用甲苯为流动相，某组分的保留时间是30min，如果改用四氯化碳或乙醚为流动相，试分析该组分的保留时间如何变化？ 3. 在液相色谱法中，梯度淋洗适用于分离何种试样？ 七、高效液相色谱的应用  1. 环境中有机氯农药残留量分析 2. 稠环芳烃的分析 正相和反相色谱的区别 六、液相色谱法流动相 流动相特性 （1）流动相的种类、配比可显著改变组分分离状况； （2）亲水性固定液常采用疏水性流动相， 称为正相液液色谱法; （3）流动相的极性大于固定液的极性，则称为反相液液色谱 。 组分在两种类型分离柱上的出峰顺序相反。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose