9.25DNA重组技术的基本工具.pptVIP

重组DNA分子的模拟操作 动一动： 选择哪种限制酶切割含目的基因的DNA，载体？ 选择哪种DNA连接酶连接目的基因和载体？ EcoRⅠ SmaⅠ 剪刀：限制酶EcoR1,Sma1 双面胶：DNA连接酶； 目的基因：含抗冻基因的DNA 载体：质粒（环状DNA分子） 选择限制酶依据： 同种限制酶分别切割载体、含目的基因的DNA， （保证载体，目的基因DNA有相同的黏性末端） DNA连接酶连接的有哪些产物呢？为什么？ 如何保证目的基因定向插入载体？ 1.1 DNA重组技术的基本工具 1、限制酶 （1）特点 2、载体 （1）作为分子运输车的特点： （2）基因工程常使用的载体： 3、DNA连接酶 （1）催化连接的化学键： （2）种类 模拟操作：重组DNA分子的模拟操作 1.1 DNA重组技术的基本工具 专题一 基因工程 1.1 DNA重组技术的基本工具 专题一 基因工程 分子手术刀 ──限制酶 分子缝合针──DNA连接酶 分子运输车──载体 番茄细胞 比目鱼 抗冻基因 提取 导入 表达 限制酶 载体 DNA连接酶 转基因抗冻番茄 重组DNA （目的基因—载体） 抗冻番茄 载体 限制酶 含抗冻基因的DNA 限制酶如何准确地将抗冻基因从所在的DNA分子中切割出来呢？ GAATTCGGCATACGAATTC CTTAAGCCGTATGCTTAAG 抗冻基因 SmaⅠ 平末端　　 　平末端 EcoRⅠ 黏性末端　　　　 黏性末端 识别序列特异性 切割位点：使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开; 识别双链DNA分子某种特定核苷酸序列； 识别双链DNA分子某种特定核苷酸序列； 使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开; 限制酶的特点： 切割结果： 形成平末端或黏性末端； 载体具备什么特点抗冻基因才能插入载体？ 抗冻基因导入番茄细胞，载体具备什么特点才能使每个细胞中都含有抗冻基因呢？ 重组DNA（载体+抗冻基因）导入番茄细胞后，如何筛选导入抗冻基因的细胞？ 载体具备什么特点才能作为分子运输车呢？ 提示 载体的特点： 有一个或多个限制酶的酶切位点； ECOR1 Sma1 质粒 自我复制， 复制原点 Ti质粒 T-DNA T-DNA 或整合到染色体DNA上，随染色体DNA同步复制； 含有特殊的标记基因； 质粒 标记基因 荧光标记基因； 抗生素抗性基因； （四环素抗性基因、氨苄青霉素抗性基因） 载体作为分子运输车的特点 有一个或多个限制酶的酶切位点； 自我复制， 或整合到染色体DNA上，随染色体DNA同步复制； 含有特殊的标记基因； 基因工程使用的载体 质粒； λ噬菌体的衍生物； 动植物病毒； DNA连接酶 载体末端 含抗冻基因DNA末端 DNA连接酶催化连接的化学键？ EcoRⅠ DNA连接酶：恢复两个核苷酸之间的磷酸二酯键 连接黏性末端 连接黏性末端和平末端 分类 作用 E.coli DNA连接酶 DNA连接酶 种类： T4DNA连接酶