微生物检验常规培养基的制作.pptVIP

5.2平板的制作 将装在锥形瓶或试管中已灭菌的琼脂培养基融化后，冷却至50摄氏度左右倾入无菌培养皿中。温度过高时，皿盖上冷凝水太多，温度低于50摄氏度，培养基易于凝固而无法制作平板。平板的制作应在酒精灯旁进行，左手拿培养皿，右手拿锥形瓶的底部或试管，左手同时用小指和手掌将棉塞打开，灼瓶口。用左手大拇指将培养皿盖打开一缝。置于桌上，轻轻旋转平皿。使培养基均匀分布于整个平皿中，冷凝后即成平板。 三、实验材料 3.1药品 牛肉膏、蛋白胨、NaCl、酵母膏、可溶性淀粉、KNO3、K2HPO4、MgSO4?7H2O和FeSO4?7H2O、马铃薯、葡萄糖、琼脂等。 3.2溶液 1mol/LNaOH、1mol/LHCl。 3.3仪器 天平、高压蒸汽灭菌器。 3.4玻璃器皿 移液管、试管、量筒、锥形瓶、培养皿、玻璃漏斗等。 3.5其他常用器皿 药匙、pH试纸、称量纸、记号笔、棉花、纱布、线绳、塑料试管盖、牛皮纸、报纸等。 四、实验内容 4.1肉膏蛋白胨培养基的配制 4.1.1培养基成分 牛肉膏 5g 蛋白胨 10g NaCl 5g 琼脂 15-20g 水 1000ml Ph 7.2 4.1.2配制方法 （1）称量及融化 分别称取蛋白胨和NaCl的所需量，置于烧杯中，加入所需水量的2/3左右的蒸馏水，用玻璃棒挑取牛肉膏置于另一烧杯中，进行称量。然后加入少量蒸馏水于小烧杯中，加热融化。倒入上述烧杯中。将烧杯置于石棉网上加热，用玻璃棒搅拌，使药品全部融化。 （2）调Ph 待溶液冷却至室温时，用1mol/lNaOH溶液调pH至7.2。 （3）定容 将溶液倒入量筒中，补充水量至所需体积。 （4）加琼脂 加入所需量的琼脂，加热融化，补充失水。 （5）分装、加塞、包扎。 （6）高压蒸汽灭菌0.1MPa灭菌20min。 4.2高氏合成一号培养基 4.3马铃薯葡萄糖培养基 4.4干粉培养基使用注意事项 培养基摇匀后准确称量； 使用蒸馏水或去离子水配制培养基； 宜用中性玻璃质容器，不宜用铜或铁质容器； 加热溶解时应适当搅拌，培养基不能过度加热； 含琼脂的培养基高压灭菌后不能长时间处于高温状态，应适当水浴及时使用或迅速冷却保存。 五、实验报告内容 5.1记录所配制的培养基的名称及成分。 5.2分析你配制培养基的碳源、氮源、能源、无机盐及维生素的来源。 六、思考题 6.1培养细菌一般常用什么培养基？培养放线菌常用什么培养基？培养酵母和霉菌常用什么培养基？现行国家标准培养基。 6.2牛肉膏应置于何种容器中称量为宜？ 6.3何谓培养基的自然pH？为什么在配制培养基时经常需要调节pH？ 第三节 玻璃器皿的包扎 1.培养皿的包扎 培养皿常用牛皮纸或旧报纸包紧，一般以5-8套培养皿包成1包。包好后干热或湿热灭菌。或者不用纸包扎，直接放入特制的金属（不锈钢或铁皮）筒内，加盖干热灭菌。 2.吸管的包扎 在干燥吸管的上端约0.5cm处，塞入一小段1-1.5cm的棉花，目的是避免将外界或嘴中杂菌吹入罐内，或不慎将菌液吸出馆外。棉花松紧要合适，若过紧，吹吸液体太费力；过松，吹气时棉花则会下滑。 挑取4-5cm宽的长纸条，将吸管尖端斜放在纸条的一端，与纸约呈30度角，折叠纸条包住尖端，左手握住吸管身，右手将吸管压紧，在桌面上向前搓转，以螺旋式包扎。上端多余的纸条打一小结。包好的多支吸管可再用一张大报纸包成一捆灭菌。 干热灭菌时，吸管可不用报纸包扎，直接放入不锈钢筒内，只需尖端朝筒底。 3.试管和三角瓶的包扎 试管塞上棉花塞，三角瓶塞上棉花塞或“通气式”纱布塞（用8层纱布代替棉花制成的塞子），目的是提供通气条件和防止杂菌污染，外用牛皮纸或2层旧报纸与细线扎好。试管可以多支扎成一捆灭菌。 谢谢！ 血平板溶血现象 6）鸡蛋和动物血清 鸡蛋和动物血清对一部分细菌来说是必须营养成分，可作为养料直接被细菌利用。常用于制备特殊培养基，如培养结核杆菌的罗氏培养基和白喉棒状杆菌的吕氏血清培养基等。此外鸡蛋和血清还具有凝固剂作用，便于观察细菌菌落形态和生长情况。 7）生长因子 在细菌生长繁殖过程中，需要一定的辅助生长因子。生长因子根据化学结构及代谢功能不同分为三大类：维生素、氨基酸和嘌呤与嘧啶。细菌对这些物质需要量不大，但如缺少，某些细菌就不能生长。通常肝浸液、肉浸液、酵母浸液和血液中含有大部分生长因子，但有时需要另外加入。 8）无机盐类 制备培养基时常加入氯化钠和磷酸盐，这是因为细菌生长繁殖需要无机盐类，如K、Na、