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第三章 细胞的全能性与器官发生细胞全能性细胞全能性 植物细胞全能性是指一个生活的植物细胞，只要有完整的膜系统和细胞核，它就会有一整套发育成一个完整植株的全部遗传信息，在适当的条件下，这些信息可以表达，再生成一个完整植株。 但是在自然状态下，由于细胞在植物体内所处位置及生理条件的不同，它的分化受到整个植株、具体器官或组织环境的束缚，致使其所具有的遗传信息不能全部表达出来，所以只能形成某种特化细胞，构成植物体的一种组织或一个器官的一部分。但它们的遗传潜力并未消失，一旦脱离原器官或组织的束缚呈游离态，并在一定的营养和环境条件下培养，就可实现其全能性。 从理论上讲，只要是一个生活的细胞，都有再生出一个完整植株的潜力，但实际情况并非如此简单。就目前所知，细胞的再生潜力与其分化程度呈负相关，就是说细胞分化程度越高其再生能力越低。越老的细胞，其基因的表达就越受到严格的制约，或者说丧失功能或不表现功能的基因越多，所以应尽量选取幼嫩的植物组织作为培养的实验材料。 1.2 脱分化(dedifferentiation) 动物细胞的分化一般是不可逆的。植物则不同，只要具有一个完整的膜系统一个细胞向分生状态回复过程所能进行的程度，取决于它在原来1，见教材p39）1 不同类型细胞脱分化过程可能进行的程度 (自Gautheret，1966) 细胞水平的再分化再分化中首先可见的是细胞壁变厚、假导管细胞的形成及酶水平的组织水平的再分化当愈伤组织在高水平生长素条件下，最常见的是维管组织的分化。松散的愈伤组织内含有大量拟分生组织或瘤状内组织分化很少，大多由高度液泡化的细胞组成。 器官水平的再分化器官水平的再分化又称为器官发生再分化的(如鳞茎、球茎、块茎等)。根据起源不同，器官发生可分为器官型和器官发生型。前者直接由外植体的细胞形成器官原基，继而 1.3.4 植株再生根和茎(包括其变态器官)或芽器官的发生可使植株重建。在离体培养中通 一个多细胞外植体通常包含着各种不同能力。 (organogenesis)途径，一种是(embryogenesis) 途径。者具体包括：①在大多数情况下，再分化过程是在愈伤组织细胞中愈伤组织形成的 在一个完整的植物中，每个分化细胞都是某个器官和组织中的一个成员，它只能在与其周围成员相互协调和彼此制约当中，恰如其分地发挥整个植株所赋予它的一定的功能，而不具备施展其全能性的外部条件。然而，这些细胞若是一旦脱离了母体植株，摆脱了原来所受到的遗传上的控制和生理上的制约，在一定的培养条件下，就会发生一种回复变化，从而失去分化状态，变为分生细胞，实现脱分化过程。然后，这些脱分化细胞经过连续的有丝分裂，形成愈伤组织。 大量的研究表明，几乎所有高等植物的各种器官，如根、茎、叶和花等，以及(如木本植物中的幼态)和外植体原来在植株上所处的位置(它反映了内源激素的水平)对愈 诱导愈伤组织常用的生长素是2，4D，IAA和NAA，常用的细胞分裂素是KT和6BA。在禾谷类植物中，多数情况下只用2，4D就能成功地诱导愈伤组1～2 mg／L的2，4D通常会产生很好的效果。NAA和2，4D虽同为生长素类物质，但若以NAA代替2，4D，上述外植体则愈伤组织形成的过程 愈伤组织形成的过程分为3个时期Yeoman等1973；王凯基等1981)： 2.2.1诱导期 诱导期又称启动期，是愈伤组织形成的起点，是外植体细胞进行分裂准备的时期。在这一时期外植体上已分化的活细胞在外源激素和其他刺激因素的作用下，外植体细胞大小没但其内部却发生了生理生化变化，RNA含量迅速增加，细胞核体积明显增大(图)。诱导期的长短因植物种类、外植体的生理状况和外部因素而异，22 h，但菊芋块茎经过5个月的贮藏后，诱导期则须延长到40 h以上。 图3－4 油橄榄愈伤组织形成过程中各期细胞形态和RNA含量的变化（引自王凯基等1981) 2.2.2分裂期 经过诱导期之后，外植体外层细胞开始迅速分裂，中间部分的细胞不分RNA含量最高时，标志着细胞分裂进入了高峰期(图)。外处于分裂期的愈伤组织的共同特征是：细胞分裂快，结构疏松，缺少有组织的结构，颜色浅而透明。如果在原培养基上培养，细胞将不可避免地发生分化，产生新的结构，而将其及时转移到新鲜培养基上，愈伤组织可无限制地进行细胞分裂，维持其不分化的状态。期(meristemoid)，称做分生组织结节。分生组织结节可以成以上对愈伤组织形成过程的时期划 2.3愈伤组织增殖的方式 为了研究愈伤组织在培养期间的形态Caplin(1947)把已建成的烟草愈伤结果发现，愈伤组织的生长是发 2.4 愈伤组织状态的调控特性来源于不同植物或同一种植物不同部位的愈伤组织，在颜色、结构和生长习，它们的遗传生理4个特2～3个特性：1）高度的胚性或再分