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组织培养笔记 绪论 组织培养的概念及意义 概念 原始意义→紧指愈伤组织培养（Callus culture） 发展至今→也称植物离体培养（Plant in vitro culture） 指从植物体分离符合需要的组织、器官或者细胞（包括去除细胞壁后的原生质体，离开花药的花粉细胞）等作为外植体（explant），通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养，以获得再生的完整植株（plantlet）或生产具有经济价值的其他生物产品的一种技术。（具有可重复性） 也可以简单概括为：在无菌和人工控制的营养（培养基）及环境条件（光照、温度等）下，研究植物的细胞，组织和器官分化发育以及调控其生长的技术。 （一）广义的组织培养 一般指利用所有类型的植物进行的无菌培养技术。 根据所利用的材料的不同，可以分为以下几种类型： 植株培养：幼苗以及较大植株的培养，也称“植物培养”。 胚胎培养（embryo culture）：指以从胚珠中分离住的成熟或者未成熟胚为外植体的无菌培养。 器官培养（Organ culture）：指以植物侧根、茎、叶、花、果等器官为外植体的离体无菌培养。如根尖、根段、茎尖、茎节、茎切断、叶原基、叶片、花瓣等等。 组织培养（Tissue culture）：指以从植物各部位分离出来的组织（分生组织、形成层、木质部、韧皮部、皮层、表皮、胚乳、薄壁细胞）或已诱导的愈伤组织为外植体的无菌培养。 细胞培养（Cell culture）：以单个游离细胞（例如：花粉、卵细胞、愈伤组织中分离出的单细胞等）作为外植体的离体无菌培养。 原生质体的培养（Protoplast culture）：指以去除细胞壁的原生质体为外植体的离体无菌培养。 （二）狭义组织培养 即愈伤组织培养：以植物接种材料某些部分细胞增殖而形成的愈伤组织为培养物的无菌培养。 一般来说，完整植株中无一正常组织与愈伤组织相对应。但其起源似乎与细胞、组织损伤刺激的增殖有关，而且认为与植物体受伤时所形成的愈伤组织相同。实际上，这些伤害刺激（外植体）只是促进细胞增殖的因素之一，甚至在某种情况下可能不是细胞增殖的主要原因，因为外植体从植株上脱离下来后不再受原植株的机制控制，因此，促进细胞增殖的决定因素应该是为外植体所提供的适宜营养物质、植物激素以及有关的物理条件。 植物组织培养的意义 概括起来，植物组织培养有着理论和实践两方面的意义： 基础理论 具有在自然条件下不能达到的无菌离体状态，以及能严格控制环境因素等优点，能用于研究植物各种细胞、组织和器官所需要的条件以及生理生化上的特点。 在细胞水平上研究诱变、筛选等遗传操作。（优点：量大、时间快、效率高） 可以为酶调节机制、细胞发育机制、器官发生、胚胎发育的细胞学、遗传机制和生化过程的研究提供极其有用的材料和独特的方法。（从形态发生方面讲） 为优质、高效保存种质资源提供了良好的条件。研究植物生产的形成过程以及定性、定量分析等可以完全避免其他因素的干扰。 （二）实际应用 通过花粉、花药培养可以获得单倍体，再加倍可以获得纯合体，因此加快了获得纯合体的速度。 通过远缘杂交的胚胎培养及试管受精得到远缘杂交植株，从而创造新的资源。 通过优良品种的快速无性繁殖，亲本材料的快速繁殖等，可以加快新品种的应用。 通过分生组织的培养以获得脱毒苗。 可用于某些药物和此生代谢产物的工业化生产。 第二节 组织培养的发展简史 一、思想准备阶段（1838-1902） 这一结算可以从1667年虎克（h·Hook）发现细胞开始，从此，在生物学中有了细胞的概念。 1、1938年，施莱登（M·J·schwann）提出职务的细胞学说 2、1839年，施旺（）认为细胞学说也适用于动物 3、他们提出的细胞学学说的核心是：细胞是生物体的基本单位，有它构成整个生物体。同时植物细胞又是在生理上、发育上具有潜在的全能性的功能单位。 如果只有存在于有机体内一样的条件时，每个细胞应该可以独立生活和发展，这一观点已成为进行组织培养研究的思想基础。 二、植物组织培养的理论点积极探索阶段（1902-1933） 1、德国植物学家 提出了“细胞全能性”的观点，即提出了高等植物的组织和器官可以不断分割，直到单个细胞的观点。他认为如果每个植物细胞都有植物个体一样的性质和潜力，那么可以通过植物的细胞培养，把单个细胞培养成新个体。 2、在其1902年发表的“植物立体培养实验”的报告中，他还提出了培囊也在组织培养中的作用和看护培养液等科学预见。 3、许多科学家在细胞全能性的影响下进行组织培养，但未能取得更多进展，只是在以下两个方面进行了初探： 第一是胚培养试验：1904年德国植物胚胎学家Hannning; (1925-1929)Laibach,亚麻种间杂交不成活种子进行胚培养试验至