色谱分析毛细管电泳概要.ppt

概述 毛细管电泳分离的一般过程 毛细管电泳分离的基本原理 基本概念 毛细管电泳的分类 毛细管电泳分离方式 毛细管电泳柱技术 毛细管电泳进样和检测技术 概述 毛细管电泳 capillary electrophresis, CE， 高效毛细管电泳 high performance capillary electrophresis, HPCE 以毛细管为分离通道，以高压直流电场为驱动力，以样品的多种特性(电荷、大小、等电点、极性、亲和行为、相分配特性等)为根据的液相微分离分析技术。 1981，75μm内径的毛细管，高电压 1984，毛细管胶束电动色谱 1987，毛细管等电聚焦 1988-1989，CE商品仪器 1989，第一届国际毛细管电泳会议 概述 毛细管电泳分离的一般过程 毛细管电泳分离的基本原理 基本概念 毛细管电泳的分类 毛细管电泳分离方式 毛细管电泳柱技术 毛细管电泳检测技术 萃取、沉淀、结晶 升华 蒸馏 过滤 降沉、离心 色谱 电泳 筛分 三、基本原理 高压电场为驱动力, 样品中各组分之间淌度和分配行为的差异，而实现分离的液相分离技术 基本构造 高压电源、毛细管、柱上检测器和缓冲液贮瓶 毛细管 数据处理 电极 检测器 电极 试样 缓冲液 缓冲液 高压电源 （可高至30KV） 高灵敏度，10-13-10-15 mol 高柱效 分析速度快，几十秒 进样量少，纳升 成本低 应用范围广 基本概念 电泳 ?electrophoresis? 是指在电解质溶液中，带电粒子在电场作用下，以不同的速度向所带电荷相反的方向发生迁移的电动现象。 电渗 (eletroosmosis) 是指在电场作用下，毛细管或固相多孔物质内液体沿固体表面移动的现象。 淌度(mobility)是指带电粒子在单位电场下的移动速度。 带电粒子在电场作用下于一定介质中所发生的定向运动 电泳淌度(μep):单位电场 (E)下的电泳速度(υ ) μep= υep /E μep = υep﹒ (L /V) = ( l / t )﹒(L /V) 电渗流 electroosmotic flow, EOF pH 3时，石英毛细管内壁带负电荷，吸引溶液中的阳离子形成双电层，在电场作用下，溶剂化了的阳离子，带动溶剂一起向阴极迁移，便形成了电渗流 电渗淌度(μeo) μeo =υeo / E = l /( teo﹒E ) 电渗流速度 毛细管有效长度 电渗流流出时间 电场强度 电泳过程中，伴随着电渗现象 电渗流的速度比电泳速度快5－7倍 带电粒子的迁移速度等于电泳和电渗流二者的矢量和 利用电渗流在一次电泳操作中同时完成正、负离子与中性分子的分离分析,洗脱顺序是: 正离子 中性分子 负离子 电渗流是毛细管电泳分离的重要参数 离子所带电荷↑ 解离度↑ 体积↓ 溶液的黏度↓ 改变外加径向电场 改变缓冲液成分和浓度 改变缓冲液pH 加入添加剂 改变温度 进样 试样导入毛细管柱时，总有一定的试样区带长度。 细内径的毛细管柱时，进样操作的要求更为严格。 一般进样区带控制在柱长的1% 电泳扩散 试样区带中的缓冲溶液浓度或电阻率与毛细管其它地方的浓度或电阻率不相等时，因两个区域电场强度的差异，而引起区带电分散。 毛细管壁对组分的吸附 电泳峰拖尾或变形，甚至消失。 抑制吸附作用常用的方法有： 使用极端pH条件 加入中性盐或两性离子化合物 对毛细管内壁进行涂层处理 需要注意：方法也会抑制或改变电渗流 概述 毛细管电泳分离的一般过程 毛细管电泳分离的基本原理 基本概念 毛细管电泳的分类 毛细管电泳分离方式 毛细管电泳柱技术 毛细管电泳检测技术 与固液界面的双电层有着密切的关系