第二章 仪器分析—薄层、气相色谱法讲解.pptVIP

薄层色谱操作 制版——干燥、活化——点样——展开——显色。 TLC与HPLC比较 固定想和流动相 样品的预处理 进样 色谱分离 定量 固定相和流动相 样品的预处理 进样 三 薄层色谱法 样品在薄层板上的吸附剂(固定相)和溶剂(移动相)之间进行分离。由于各种化合物的吸附能力各不相同，在展开剂上移时，它们进行不同程度的解吸，从而达到分离的目的。 受制于检测器 几乎不受限制 流动相选择 反复使用 泵 是 HPLC 一次性使用 毛细作用力 否 TLC 固定相 流量控制 封闭系统 HPLC-复杂 TLC-简单 受限制 受限制 样品体积 一次一样 限制严格 有限制 HPLC 一次多样 有限制 任意 TLC 样品数量 样品浓度 溶解样品的溶剂 薄层扫描法  薄层扫描法（TLCS）系指用一定波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱中有紫外或可见吸收的斑点或经照射能激发产生荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分值用于药品的质量检查的方法。  ①薄层吸收扫描法 光源：钨灯和氘灯； 灵敏度：在200-800nm波长范围内选择合适波长进行测定，其灵敏度可达ng级； 适用范围：适用于在可见、紫外区有吸收的物质，及通过色谱前或色谱后衍生成上述化合物的样品组分。 ②薄层荧光扫描法 光源：氙灯或汞灯。 灵敏度：最低可测到10-50pg。 适用范围：适合于本身具有荧光或经过适当处理后可产生荧光的物质的测定。 定量分析方法 常用的定量方法有外标法、内标法、追加法（叠加法）及回归曲线定量法。 外标法 外标法是薄层色谱扫描最常用的定量方法，方法简便，但点样必须准确。 A.外标一点法 工作曲线通过原点（截距为零）时可用外标一点法定量。 计算公式为： C=F1·A 式中：C为组分的重量或浓度，A为测得该组分的峰面积，F1为直线的斜率或比例常数。 B.外标二点法 工作曲线不通过原点时，只能用外标二点法定量。 计算公式为： C=F1A+F2 式中：C、A同前，F1为直线的斜率或比例常数，F2为纵坐标的截距，F1和F2值由仪器自动算出。 内标法 内标法是选一个纯物质作为内标物，并准确称取一定量内标物加至供试液及标准液中，计算供试品溶液中某组分含量的定量方法。 回归曲线定量法 A.将不同浓度（或不同量）的标准溶液与供试液点在同一块薄层板上，展开、扫描; B.由计算机对所测得的峰面积及相应点样量进行线性或非线性回归; C.直接由回归方程或回归曲线计算供试液含量的方法。 追加法 追加法适用于成分复杂样品的定量分析，既具有内标法的特点又不需要内标物，方法与HPLC的内加法类似。 四 气 相 色 谱 法 气相色谱法（GC）是将汽化后的试样由载气（流动相）带入色谱柱，根据各组分在流动相和固定相间作用的不同而分离，并随载气依次流出气谱柱，经检测器检测，利用保留值进行定性，色谱峰面积或峰高进行定量的分析方法。 气相色谱结构流程 1-载气钢瓶；2-减压阀； 3-净化干燥管；4-针形阀；5-流量计;6-压力表；4-针形阀；5-流量计;6-压力表；7-进样器；8－色谱柱；9-热导检测器；10-放大器；11-温度控制器；12-记录仪； 载气系统 进样系统 色谱柱 检测记录系统 温控系统 1-6 11 9-10,12 8 7 一、实验条件的选择 1、分离条件的选择 固定相 柱温 载气 （1）固定相的选择 一般按极性相似的原则来选择。 ①非极性化合物，应选非极性固定液，基本上是按沸点顺序出柱，低沸点先出柱。 ②中等极性化合物，选中等极性固定液，基本上仍按沸点顺序出柱。 ③极性化合物，选用极性固定液，组分按极性顺序出柱，极性弱的组分先出柱。 （2）柱温的选择 温度每减少30 ℃，保留时间增加一倍 ①高沸点样品（沸点300℃～400℃），采用 1％~5％低固定液配比，柱温200℃～250℃。 ②气体等低沸点采用15%～25%高固定相配比，柱温选沸点左右，在室温或50℃下进行分析。 ③对于宽沸程样品，需选择程序升温方法进行。 （3）载气的选择 当采用低流速时，宜用分子量较大的N2，当高流速时，宜用分子量低、粘度小的H2或He。 当使用TCD时，为提高灵敏度，宜用H2或 He。FID、ECD等一般常用N2。 通常载气流速可为20～80ml/min，可通过实验选择最佳流速，但为缩短分析时间，载气流通常高于最佳流速。 (4)其他条件的选择 ①气化室温度 保证瞬间气化，高于柱温30℃～50℃。 ②检测室温度