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2013-06-20 承担单位：福建省农科院农业生物资源研究所 试验设计： 试验项目：蟑螂内生细菌16S rRNA的鉴定（二） 试验人员：李涛 试验负责：阮传清 报告日期：2013-06-20 计数月份：2013年06月 研究资格系数 (0.5-1.0) 实验设计系数 （0.9-1.0） 报告得分 总分 实验设计 实验记载 实验分析 实验简报 实验文章 1-20% 21-40% 41-60% 61-80% 81-100% 1%-5% 设计不足，实施错误 6%-10% 设计不全，实验无果 11%-15% 设计可以，实施不全 16%-20% 设计完整，分布实施 21%-25% 实验不全，记载无果 26%-30% 实验不足，记载不全 31%-35% 独立实验，记载不全 36%-40% 分布实验，记载完整 41%-45% 目的明确，实验完成 46%-50% 实验完整，记载清晰 51%-55% 实验系统，结果可信 56%-60% 实验创新，分析清晰 61%-65% 实验创新，结论清晰 66%-70% 实验完整，统计清晰 71%-75% 实验系统，数据可靠 76%-80% 报告完整，文章雏形 81%-85% 结构合理，分析有据 86%-90% 逻辑清晰，统计合理 91%-95% 图表完整，写作流畅 96%-100% 文献完整，发表水平 福建省农业科学院农业生物资源研究所 农业微生物研究中心 电话:0591传真:0591 HYPERLINK / fjat HYPERLINK / . 1．试验目的 蟑螂又名小强，体扁平，黑褐色，通常中等大小。头小，能活动。触角长丝状，复眼发达。翅平，前翅为革质后翅为膜质，前后翅基本等大，覆盖于腹部背面；有的种类无翅。不善飞，能疾走。不完全变态。产卵于卵鞘内。蟑螂是杂食性昆虫，食物种类非常广泛。各类食品，包括面包、米饭、糕点、荤素熟食品、瓜果以及HYPERLINK /view/70238.htm \t _blank饮料等等，尤其喜食香、甜、油的面制食品。蟑螂有嗜食HYPERLINK /view/42596.htm \t _blank油脂的习性，在各种植物油中，香麻油对它们最有引诱力，所以有些地方称它们为“HYPERLINK /view/243494.htm \t _blank偷油婆”。在食糖中，HYPERLINK /view/281988.htm \t _blank红糖、饴糖对它们的引诱力最强。除了喜爱各类食品外，蟑螂也常咬食其他物品，例如在住房、仓库、贮藏室等处，它们可啃食棉毛制品、皮革制品、纸张、书籍、肥皂等等。在室外垃圾堆、阴沟和HYPERLINK /view/24960.htm \t _blank厕所等场所，它们又以腐败的有机物为食，甚而啃咬死动物。正是由于蟑螂到处爬行，无所不吃，它们沾染和吞入了很多HYPERLINK /view/91398.htm \t _blank病原体，再加上它们边吃边拉的恶习，成为一些病原体的机械性传播者。蟑螂携带病菌最多，它携带HYPERLINK /view/269060.htm \t _blank鼠疫杆菌、痢疾杆菌、HYPERLINK /view/29729.htm \t _blank大肠杆菌、脊椎灰质炎病毒和黄曲霉毒等40多种病原体，而且其分泌物和粪便中还含有多种致癌物质。此外还分泌一种有特殊恶臭的油状物，在食物和餐具及日常用具上爬行时留下异味和多种病原体，对人类危害极大。 近年来，RAPD、AFLP、RFLP以rDNA等分子生物学技术在细菌、真菌的分类及鉴定中应用逐渐增多[1-5]。16SrRNA作为蛋白质合成的必要场所，存在于所有原核生物的细胞中并执行相同的功能，由于该蛋白分子序列变化缓慢，能够跨越整个生命进化过程，而且它的分子中含有进化速度不同的区域，可用于进化程度不同的生物之间的系统发育研究[6]，因此，目前该技术在原核生物的鉴定中应用非常广泛。 本实验通过提取细菌总DNA，利用细菌16SrRNA通用引物，鉴定了从蟑螂体内分离出来的细菌，并进行测序及序列比对分析，以确定所分离的菌株的分类地位。 2．试验方法 2.1材料与仪器 2.1.1供试菌株 从蟑螂体内分离到的3株内生细菌株，菌株编号分别为：FJAT-17795、FJAT-17796、FJAT-17797 2.1.2仪器 （1）试剂 PCR扩增：采用细菌通用16SrRNA引物[4]9F5-GAGTTTGATCCTGGCTCAG-3（9-27）和1542R5-AGAAAGGAGGTGATCCAGCC-3（1542-1525），引物由上海生物工程有限公司合成。 PCR反应试剂：10×Buffer，dNTP（10mM/each），Taq酶（2.5U/μL）（上海博尚生工生物工