实验一显微镜的使用和细菌单染色.ppt.ppt

微生物学实验 生物技术系 陈 敏 实验须知 进实验室必须穿白大褂，离开时脱下反折保存。 每次实验前必须对实验内容进行充分预习，了解实验目的、原理和方法，做到心中有数，思路清楚。 实验室内应保持整洁，勿高声谈话和随便走动，保持室内安静。 实验时小心仔细，全部操作应严格按操作规程进行，万一遇有皮肤破伤或菌液吸入口中等意外情况发生时，应立即报告指导教师，及时处理。 实验过程中，切勿使乙醇、乙醚、丙酮等易燃药品接近火焰。如遇火险，应先关掉火源，再用湿布或沙土掩盖灭火，必要时用灭火机。 实验室中的菌种和物品等，未经教师许可，不得带出实验室外。 认真、及时做好实验记录，对于当时不能得到结果而需要连续观察的实验，则需记下每次观察的现象和结果，以便分析，及时上交实验报告。 每次实验完毕，必须把所用仪器擦净放妥。将实验室收拾整齐，擦净桌面。凡带菌器具（如试管、玻片等）须煮沸消毒后再进行洗涤。 离开实验室前将手洗净，注意关闭火、水、电、门窗等。 显微镜的使用和细菌单染色法 实验目的 1、掌握显微镜（油镜）的使用方法 2、学习无菌操作技术；掌握细菌的简单染色法 3、初步认识细菌的形态特征 一、普通光学显微镜的使用 显微镜的基本结构 油镜的使用 实验步骤 显微镜的基本结构 普通光学显微镜是利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，所以又被称为复式显微镜。它们是由机械装置和光学系统两部分组成 油镜的使用原理 香柏油与玻璃的折射率相近 显微镜的分辨率是指能被显微镜清晰区分的两个物点的最小间距 分辨率=λ/2NA（λ=光波波长，NA=物镜的数值孔径值） NA=n×sinθ（n=玻片与镜头间介质的折射率，θ=最大镜口角的1/2 ） 实验步骤 1.观察前准备：显微镜放置 光源调节 2.显微观察：低倍镜观察 高倍镜观察 油镜观察 3.观察后处理 注意： 油镜的工作距离很小，所以要防止载玻片和物镜的损坏。如果是共焦点的显微镜，当高倍物镜聚焦标本后，只要稍微转动微调即可。如果不出现物象要重找，对准焦点的方法是从显微镜的侧面观察，将油镜缓缓下移到与载玻片稍微接触为止，然后用微调向上提升调准焦点。 观察后处理 1）上升镜筒，取下载玻片； 2）用擦镜纸拭去镜头上的镜油；然后用擦 镜纸蘸少许二甲苯擦去镜头上残留的油 迹；最后再用干净的擦镜纸擦去残留的 二甲苯； 3）将各部分还原：转动旋转器使镜头离开通光孔（物镜转成“八”字式），下降镜台，下降聚光器（但不要接触反光镜）、关闭光圈，推片器回位，关闭内置电源。 二、细菌的单染色法 实验原理 实验器材 实验步骤 实验结果 实验原理 简单染色法是利用一种染料对细菌进行染色的方法。该法操作简单、方便、适用于菌体的个体形态和排列方式的观察。 细菌细胞表面通常带负电荷。碱性染料在电离时带正电荷，所以很容易与细菌结合使细菌着色。染色后的细菌在显微镜下易于识别常用的碱性染料有：美蓝、结晶紫、番红、孔雀绿等。 实验器材 1、菌种：枯草芽孢杆菌 2、染色剂：草酸铵结晶紫染液、齐氏石炭酸复红染液等 3、仪器：显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、双层瓶、擦镜纸、洗瓶等 实验步骤 涂片：取干净的载玻片于实验台上，在载玻片的中央滴1小滴水，从斜面挑取少量菌种（无菌操作）于玻片上的水滴混匀后，在载玻片上涂布成一均匀的薄层，涂布面不宜过大。 水洗：用洗瓶的水从载玻片的一端流下冲洗，直到冲下的水无色为止，水流不能过急过大，以免涂片膜脱落。 干燥：自然干燥或用电吹风吹干。 镜检：按照低倍镜到高倍镜，最后用油镜观察。涂片必须完全干燥后才能用油镜观察。 细菌的形态观察 * * 实验须知 实验须知 使照明亮度提高 玻璃n=1.55 香柏油n=1.52 增加显微镜的分辨率 分辨率= λ/ 2n sin θ θ为物镜镜口角的半数，它取决于物镜的直径和工作距离。空气 (n=1.0)、水(n=1.33)、香柏油(n=1.52)、玻璃 ( n=1.54) 增加显微镜的分辨率 油镜观察 1）将聚光器上升到最高位置，光圈开到最大；2）转动转换器，使高倍镜头离开通光孔，在需观察部位的玻片上滴加一滴香柏油，然后慢慢转动油镜，使镜头浸入油中；3）用双眼观察目镜，并慢慢转动细调节器至物象清晰为止。 涂片 干燥 固定 染色 水洗 干燥 镜检 干燥：室温自然干燥。 固定 ：涂面朝上，通过火焰2-3次。此操作过程为热固定，目的是使