1.1DNA重组技术的基本工具试卷.ppt

质粒是基因工程中最常用的运载体，它的主要特点是 ①能自主复制 ②不能自主复制 ③结构很小 ④蛋白质 ⑤环状RNA ⑥环状DNA ⑦能“友好”地“借居” A．①③⑤⑦ B．①④⑥ C．①③⑥⑦ D．②③⑥⑦ C * 蓝色素基因 三色紫罗兰 玫瑰 导入 一、基因工程的概念 目的基因 受体细胞 基因工程的概念 基因工程又叫做 或 。通俗地说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种 提取出来，加以 ，然后放到另一种生物的细胞里， 改造生物的遗传性状。 基因拼接技术 DNA重组技术 基因 修饰改造 定向地 基因工程名称 基因拼接技术或DNA重组技术 实质:基因重组 操作环境 生物体外 操作对象 基因 操作水平 DNA分子水平 基本过程 “剪切”“拼接”“导入”“表达” 结果 人类需要的基因产物 基因工程的概念 这种技术是在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切” 和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的基因产物。 提供的材料 1、一段含有三色紫罗兰蓝色素基因的DNA片段 2、受体细胞-----玫瑰体细胞 要实现三色紫罗兰的蓝色素基因在玫瑰体细胞内表达从而获得相应性状，我们该怎么做呢？ 基因工程培育蓝色妖姬的关键步骤： 关键步骤一： 在体外对含有三色紫罗兰蓝色素基因的DNA分子进行切割 关键步骤二： 三色紫罗兰蓝色素基因与质粒连接 关键步骤三： 三色紫罗兰蓝色素基因导入受体(玫瑰）细胞 基因的剪刀——限制酶 基因的针线——DNA连接酶 基因的运载工具——载体 二、DNA 重组技术的基本工具 “分子手术刀” ──限制酶 “分子缝合针” ──DNA连接酶 “分子运输车” ──基因进入受体细胞的载体 识别双链DNA 分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 主要是从原核生物中分离纯化出来的一种酶。能将外来的DNA切断，由于这种切割作用是在DNA分子内部进行的，故名限制性核酸内切酶。 4000种。 1、来源： 2、种类： 3、作用： 4、结果： 形成两种末端 （1） “分子手术刀” ——限制性核酸内切酶 黏性末端 平末端 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ 脱氧核苷酸的结构 G 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ A 3’,5’-磷酸二酯键 3’端 5’端 3’端 5’端 磷酸二酯键 T 磷酸二酯键 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 A * 仔细观察各限制酶 识别的特定序列有何 特点？ 限制酶的识别序列 限制酶所识别的序列的特点是：呈现碱基互补对称，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的 ，称为回文序列 中轴线 在G与A之间切割 大肠杆菌的一种限制酶(EcoRⅠ)只能识别 GAATTC 序列，并在G和A之间切开。 EcoRI限制酶的作用 　 黏性末端　　　　 黏性末端 EcoRI限制酶的切割 被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 SmaI只能识别CCCGGG序 列，并在C和G之间切开。 中轴线 SmaI限制酶的作用 在G与C之间切割 平末端　　　平末端 SmaI限制酶的切割 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。 你能推测限制酶存在于原核生物中的作用是什么吗？ 原核生物易受自然界外源DNA的入侵，但生物 在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机 制，以防止外来病原物的侵害。限制酶就是细 菌的一种防御性工具，当外源DNA侵入时，会 利用限制酶将外源DNA切割掉，以保证自身的 安全。所以，限制酶在原核生物中主要起到切 割外源DNA、使之失效，从而达到保护自身的 目的。 寻根问底 为什么限制酶不剪切细菌本身的DNA？ 通过长期的进化，细菌中含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中不具备这种限制酶的识别切割序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。这样，尽管细菌中含有某种限制酶也不会使自身的DNA被切断，并且可以防止外源DNA的入侵。 * 类型 来源 功能 相同点 差别