2015-2016学年人教版选修三 DNA重组技术的基本工具 课件（36张）.pptVIP

　 EcoRⅠ 黏性末端　　　　 黏性末端 A A T T C G T T A A G C SmaⅠ 平末端　　　平末端 二、“分子缝合针” —— DNA连接酶 1、作用: 把切下来的DNA片段拼接成新的DNA，即将脱氧核糖和磷酸连接起来. 2、作用原理： 催化磷酸二酯键形成 3、种类： E·coli DNA连接酶 T4 DNA连接酶 可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来， E·coli DNA连接酶　　　　　　　　或T4DNA连接酶 即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 　 T4 DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率较低 T4DNA连接酶 类型 E·coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 来源 功能 大肠杆菌 T4噬菌体 恢复 磷酸 二酯键 只能连接黏性末端 能连接黏性末端和平末端(效率较低) 相同点 差别 （二）“分子缝合针”——DNA连接酶 DNA聚合酶 DNA连接酶 区别1 区别2 相同点 DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗?为什么? 1)只能将单个核苷酸连接到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯键 形成磷酸二酯键 1)在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键 2)以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键连接成一条互补的DNA链 2)将DNA双链上的两个缺口同时连接起来，不需要模板 常用的载体：质粒 能复制并带着插入的目的基因一起复制 有切割位点 有标记基因的存在，可用含氨苄青霉素的培养基鉴别 三、“分子运输车”——基因进入受体细胞的载体 ⒈载体需要的条件： 　　 （1）有1至多个限制酶切点 （2）能在受体细胞中能自主复制 （3）有某些标记基因，便于筛选 （4）对受体细胞无害 （5）分子大小适合，以便提取和体外操作 三、“分子运输车”——基因进入受体细胞的载体 在进行基因工程操作中，真正被用作载体的质粒，都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的。 ⒉常用运载体： 　 （1）细菌的质粒 　 （2）λ噬菌体的衍生物 （3）动植物病毒 ……ATAGCATGCTATCCATG ……TATCGTACGATAGGTACTTAA AATTCGGCATAC …… GCCGTATG …… ……TCCTAG ……AGGATCTTAA AATTCCATAC…… GGTATG…… AATTCTCGGTATG GAGCCATACTTAA 2 7 4 8 3 6 1 5 思考与探究 P7 思考与探究 P7 2、为什么限制酶不剪切细菌本身的DNA？ 通过长期的进化，细菌中含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中或者不具备这种限制酶的识别切割序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。这样，尽管细菌中含有某种限制酶也不会使自身的DNA被切断，并且可以防止外源DNA的入侵。 3、天然的DNA分子可以直接用做基因工程载体吗？为什么？ 提示： 基因工程中作为载体使用的DNA分子很多都是质粒（plasmid），即独立于细菌拟核染色体DNA之外的一种可以自我复制、双链闭环的裸露的DNA分子。 是否任何质粒都可以作为基因工程载体使用呢？ 不是，作为基因工程使用的载体必需满足以下条件： 思考与探究 P7 1） 载体DNA必需有一个或多个限制酶的切割位点，以便目的基因可以插入到载体上去。这些供目的基因插入的限制酶的切点所处的位置，还必须是在质粒本身需要的基因片段之外，这样才不至于因目的基因的插入而失活。 2） 载体DNA必需具备自我复制的能力，或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA的复制而同步复制。 3） 载体DNA必需带有标记基因，以便重组后进行重组子的筛选。 4） 载体DNA必需是安全的，不会对受体细胞有害，或不能进入到除受体细胞外的其他生物细胞中去。 5） 载体DNA分子大小应适合，以便提取和在体外进行操作，太大就不便操作。 实际上自然存在的质粒DNA分子并不完全具备上述条件，都要进行人工改造后才能用于基因工程操作。 4、DNA连接酶有连接单链DNA的本领吗？ 迄今为止，所发现的DNA连接酶都不具有连接单链DNA的能力，至于原因，现在还不清楚，也许将来会发现可以连接单链DNA的酶。 思考与探究 P7 专题1 基因工程 1.1 DNA重组技术的基本工具 抗虫棉 普通棉 基因工程的产物 转基因抗虫棉 基因工程的产物 基因工程的产物 基因工程的产物 奇 思 妙 想 奇 思 妙 想 什么叫基因工程？ 基因工程，又叫DNA重组技术。通俗的说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，