6.3基因工程与转基因生物20160314试卷.pptVIP

* A.DNA连接酶作用同一条多核苷酸链相邻脱氧核苷酸之间，使形成共价键。两条链之间的碱基由氢键相互吸引，非共价键。 BC正确 D.人工合成目的基因不需要用限制酶了，p58-59页有述。 * A、正确 B、细胞外完成，基因工程许多工作都在试管内进行 C、不对。只有符合要求的质粒才能作为运载体，三个条件：1。受体细胞中稳定保存和复制 2。具有多个限制酶切位点，便于与外源基因连接。 3。具有某些标记基因。 D、蛋白质中氨基酸序列由基因中碱基序列决定。 * * 特点：交错切开，片段有相同末端。（让学生讲） 限制酶种类： 200多种 限制酶来源：到目前为止，细菌是限制性内切酶，尤其是特异性非常强的I类限制性内切酶的主要来源。 限制酶与核酸酶的区别： 限制酶 一、核酸外切酶 　　有些核酸酶能从DNA或RNA链的一端逐个水解下单核苷酸，所以称为核酸外切酶。只作用于DNA的核酸外切酶称为脱氧核糖核酸外切酶，只作用于RNA的核酸外切酶称为核糖核酸外切酶；也有一些核酸外切酶可以作用于DNA或RNA。核酸外切酶从3′端开始逐个水解核苷酸，称为3′→5′外切酶，例如，蛇毒磷酸二酯酶即是一种3′→5′外切酶，水解产物为5′核苷酸；核酸外切酶从5′端开始逐个水解核苷酸，称为5′→3′外切酶，例如：牛脾磷酸二酯酶即是一种5′→3′外切酶，水解产物为3′核苷酸。 二、核酸内切酶 　　核酸内切酶催化水解多核苷酸内部的磷酸二酯键。有些核酸内切酶仅水解5′磷酸二酯键，把磷酸基团留在3′位置上，称为5′-内切酶；而有些仅水解3′-磷酸二酯键，把磷酸基团留在5′位置上，称为3′-内切酶。还有一些核酸内切酶对磷酸酯键一侧的碱基有专一要求，例如胰脏核糖核酸酶（RNaseA）即是一种高度专一性核酸内切酶，它作用于嘧啶核苷酸的C′3上的磷酸根和相邻核苷酸的C′5之间的键，产物为3′嘧啶单核苷酸或以3′嘧啶核苷酸结尾的低聚核苷酸。 粘性末端：限制酶 得到的DNA片段都带有含数个碱基的单链尾巴，彼此互补，这个单链尾巴就叫粘性末端。注意：考试中一般要把最近的那对碱基带上。 * 氢键怎么断裂或者生成？ 跟限制酶、DNA连接酶无关 * 运载体：护送目的基因。常用的还有噬菌体。 运载体的特征：1。受体细胞中稳定保存和复制 2。具有多个限制酶切位点，便于与外源基因连接。 3。具有某些标记基因。 微生物基因工程用质粒较多，植物基因工程也可以用质粒（好像不是纯粹的质粒，是质粒感染的细菌），动物基因工程用病毒较多，偶尔也 用病毒-质粒复合体。 质粒是真核细胞细胞核外或原核生物拟核区外能够进行自主复制的遗传单位，包括真核生物的细胞器（主要指线粒体和叶绿体）中和细菌细胞拟核区以外的环状脱氧核糖核酸(DNA）分子。现在习惯上用来专指细菌(大肠杆菌）、酵母菌和放线菌等生物中细胞核或拟核中的DNA以外的DNA分子。 一般没人说线粒体、叶绿体里面的质粒，虽然两者内都有很多环状DNA。 细菌、线粒体、叶绿体里面的DNA都是双联闭环的。 习惯上将核区的DNA叫做染色体DNA，细菌实际上无染色体。 * 过去从猪脑中提取生长激素，效率低下。 从细胞中分离目的基因方法：首先要确定目的基因在细胞内DNA分子上的位置，这叫基因定位。然后用限制酶从DNA分子长链中切取这段基因。 为什么切取目的基因和切开质粒一般要用相同的限制酶？会产生相同的黏性末端——通过碱基互补配对，来源不同的DNA片段能够重组。 受体细胞：接纳重组质粒的活细胞。微生物、植物细胞、动物细胞。 化学方法人工合成：  ①反转录法【逆转录酶+DNA聚合酶】 ②DNA合成仪【自动合成，简便、成熟】 ③PCR扩增【93℃→60 ℃→72 ℃】 从生物细胞中分离目的基因的两大步骤依次是什么？【基因定位→限制酶切取】该方法的优缺点如何？优：操作简便。 缺：工作量大； 具有一定盲目性（专一性差，断片不一定是一个基因）。 培育能产生人胰岛素的大肠杆菌时，胰岛素基因为何不从人体细胞中直接分离？ 真核基因较大（因为内含子比较长），几乎不可能找到运载体的黏性末端；含有不表达的DNA片段（内含子），不能直接用于基因的扩增和在大肠杆菌中表达。 人工合成法中，反转录法必须首先提取组织细胞中的mRNA。如要合成胰岛素基因，只能从胰岛细胞中获取mRNA，因为胰岛素基因只在胰岛B细胞中表达。 根据已知氨基酸序列推得的胰岛素基因碱基序列与细胞中的胰岛素基因不相同。原因是：密码子具有简并性；真核基因还有内含子和非编码区等调控序列。这种方法可以合成自然界不存在的新基因；且适合于用原核细胞表达真核基因产物，因为目的基因连续的编码区与原核基因的结构相符。 导入方法