1.1DNA重组技术的基本工具 学案（人教版选修三）.doc

第1节 DNA重组技术的基本工具 【本节重难点】 重点：DNA重组技术所需的三种基本工具的作用 难点：基因工程载体所需要具备的条件 【知识精讲】 教材梳理 知识点一 基因工程的概念：基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫做DNA重组技术。 注意：对本概念应从以下几个方面理解： 操作环境 生物体外 操作对象 基因 操作水平 DNA分子水平 基本过程 剪切→拼接→导入→表达 结果 人类需要的基因产物 知识点二 基因工程的基本工具 1.限制性核酸内切酶——“分子手术刀” （1）限制性内切酶的来源：主要是从原核生物中分离纯化来的。 （2）限制性内切酶的功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并能将每一条链上特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键切开。 （3）限制性内切酶的切割方式：①在中心轴线两侧将DNA切开，切口是黏性末端。②沿着中心轴线切开DNA，切口是平末端。 注意：比较有关的DNA酶 （1）DNA水解酶：能够将DNA水解成四种脱氧核苷酸，彻底水解成膦酸、脱氧核糖和含氮碱基 （2）DNA解旋酶：能够将DNA或DNA的某一段解成两条长链，作用的部位是碱基和碱基之间的氢键。注意：使DNA解成两条长链的方法除用解旋酶以外，在适当的高温（如94℃）、重金属盐的作用下，也可使DNA解旋。 （3）DNA聚合酶：能将单个的核苷酸通过磷酸二酯键连接成DNA长链。 （4）DNA连接酶：是连接双链DNA的缺口主要是介绍DNA重组技术的三种基本工具及其作用。限制酶──“分子手术刀”，主要是介绍限制酶的作用，切割后产生的结果。在这部分内容学习时，限制酶从哪里寻找联想从前学过的内容──噬菌体侵染细菌的实验，进而认识细菌等单细胞生物容易受到自然界外源DNA的入侵。那么这类原核生物之所以长期进化而不绝灭，有何保护机制？进而可能是有什么酶来切割外源DNA，而使之失效，达到保护自身的目的”。这样就酶主要是从原核生物中分离纯化出来DNA连接酶──DNA片段的“分子缝合针”，我们可以从原有的知识出发，要想切开的DNA，基因进入受体细胞的载体──“分子运输车”的学习内容，不能仅仅着眼于记住这几个条件，而应该通过，明确为什么要有这条件才能充当载体。限制酶所识别序列特点限制酶所识别的序列，无论是个碱基还是个碱基，都可以找到一条中心轴线，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。 拓展点二 DNA连接酶连接的是什么部位？ DNA连接酶是将一段DNA片段3′端的羟基与另一DNA片段5′端磷酸基团上的羟基连接起来形成酯键，而不是连接互补碱基之间的氢键。 析：本题考查的知识点是基因工程的。基因工程是在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行改造(目的性强)和重新组合(基因重组)，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的基因产物.但并不是所有的基因产物对人类都有益的．在基因工程中用来完成基因的剪接的工具是 A．限制酶和连接酶 B．限制酶和水解酶 C．限制酶和运载体 D连接酶和运载体．有关基因工程的叙述正确的是 A．限制酶只在获取目的基因时才用B．重组质粒的形成是在细胞内完成的 C．质粒都可以作为运载体 D．蛋白质的氨基酸排列顺序可以为合成目的基因提供线索 A．细菌质粒 B．噬菌体 C．动植物病毒 D．细菌核区的DNA限制酶所识别序列特点．（1）限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。在质粒上1个酶Ⅱ的切点。 ___________________________ ②请画出目的基因两侧被限制酶Ⅱ切割后形成的黏性未端。_____________________ ③在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的________________________________________________________ 分析：本题主要考察黏性末端的知识。解答本题的关键是理解限制酶的特点。在切割目的基因和运载体时，一定要使用同一种限制性内切酶，这样，切出的切口才一样，才能进行碱基互补配对连接起来。两个黏性末端只要一样就可以进行碱基互补配对，再通过DNA连接酶连接起来。 答案：（1） 点评：限制酶所识别的是特定的碱基序列，并在特定部位进行切割，限制酶不同，所识别的碱基序列不同，黏性末端不同。但不同的粘性末端有时是可以进行拼接的，如：黏性末端。两者不要混淆。