1.1 基因工程概述 学案 苏教版选修3.doc

1.1 基因工程概述 学案 苏教版选修3 学习目标 1、说出基因工程的概念（A）））） 基因工程的诞生和发展经历了三个时期：1973—1976年为 ，1977—1981年为 ，1982年以后为 。 1973年，美国科学家 等将两种不同来源的DNA分子进行体外重组，并首次实现了在大肠杆菌中的表达，创立了 的新技术———基因工程。 因此，基因工程又称为。剪切拼接导入表达人类需要的基因产物 1、主要是从 生物中分离纯化出来的。 2、作用：能够识别双链DNA分子的 ，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的 断开。 3、特点:具有专一性，表现在两个方面： ①识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列。②切割特定序列中的特定位点。 4、结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式： 末端和 末端。 例1、下列有关基因工程中限制内切酶的描述，错误的是（ ） A．一种限制性内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列； B．限制性内切酶的活性受温度的影响； C．限制性内切酶能别和切割RNA；D．限制性内切酶可从原核生物中提取。 思考：限制性核酸内切酶的本质是什么？限制酶与解旋酶有什么区别？（它的本质是蛋白质，它也具有高效性、专一性、温和性等酶的基本特点。限制酶主要作用于两个核苷酸之间的磷酸二酯键，而解旋酶主要作用于碱基对之间的氢键） 根据酶的来源不同，可分为EcoliDNA连接酶和T4DNA连接酶两类DNA连接酶 (E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶)的比较： ⑴相同点：都缝合磷酸二酯键 ⑵区别：E．coIiDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能使黏性末端之间连接；T4DNA连接酶来源于T4噬菌体，能缝合两种末端，但连接平末端之间的效率较低。 ▲DNA连接酶与DNA聚合酶作用的比较 DNA连接酶DNA聚合酶DNA 双链 单链 模板 不要模板 要模板 连接的对象 2个DNA片段 单个脱氧核苷酸加到已存在的单链DNA片段上 相同点 作用实质 形成磷酸二酯键 化学本质 蛋白质 ㈢载体——“ ” 1、载体的作用： 。 2、载体具备条件： 3、载体： 四、基因工程的基本过程 ㈠获得目的基因（目的基因的获取） 1、获取方法主要有三种：⑴从自然界中已有的物种中分离出来，如可从基因文库中获取。⑵用人工的方法合成。⑶利用90～95℃ DNA解链为单链； 第二步：冷却到55～60℃，引物与两条单链DNA结合； 第三步：加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始进行互补链的合成。 （5）特点：指数形式扩增 、★获得原核细胞的目的基因可采取直接分离，获取真核细胞的目的基因一般是人工合成。 ★人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法。 ㈡制备重组DNA分子（基因载体1、重组DNA分子的组成：除了目的基因外，还必须有标记基因。（标记基因的作用：鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来） 2、方法：用 分别切割载体和目的基因，再用 把两者连接。 ㈢转化受体细胞（将 导入受体细胞） 1、转化的概念：常用的转化方法：将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法 ⑵将目的基因导入动物细胞：最常用的方法 ⑶将目的基因导入微生物细胞： ㈣筛选出获得目的基因的受体细胞、培养受体细胞并诱导目的基因的表达（目的基因的检测与鉴定） 1、分子水平的检测： ⑴首先要检测 ⑵其次还要检测 ⑶最后检测 2、个体生物学水平的鉴定：有时还需进行