浸润性乳腺癌中mtDNAHV2区突变及意义.docVIP

浸润性乳腺癌中mtDNAHV2区突变及意义 　　摘要：目的 检测乳腺癌患者mtDNA D-loop环HV2区体细胞性突变并探讨它在肿瘤发生中的作用。方法 采用聚合酶链反应-单链构像多态性（PCR-SSCP）的方法对20例浸润性乳腺导管癌组织和癌旁正常组织的mtDNA非编码区D-loop环HV2区进行分析，将出现异常条带所有标本进行基因测序。结果 经PCR-SSCP检测，在20例乳腺癌mtDNA中共发现7例出现异常条带；测序结果显示，7例?y序标本中，HV2区共检测到31个新的突变位点，其中有3个属于微卫星不稳定性（microsatellite instability，MSI），7例移码突变，其余为点突变（point mutation），7个位点位于复制和转录的区域。结论 浸润性乳腺导管癌mtDNA HV2区是一个高度多态性和突变性的区域，它与乳腺癌的发生、发展有重要关系。 　　关键词：浸润性乳腺癌；mtDNA；HV2区；聚合酶链反应-单链构像多态性 　　Abstract：Objective To detect the effect of mutations of HV2 region of D-loop in mtDNA of the breast cancer.Methods It analysed the HV2 region of D-loop in mtDNA in the 20 cases invasive ductual breast carcinoma and 20 cases paracarcinoma tissues by PCR and PCR-single stranded conformation polymorism.Results The 7 cases exceptional bands were found from 20 breast carcinoma in all of the samples by PCR-SSCP；and the sequencing results indicated that 31 new HV2 mutations were found in 7 sequencing specimens，the 3 of them were mitochondrial microsatellite instability（MSI）；the 7 of them were frameshift mutations；others were point mutation；and the 7 of them located in the region of mtDNA replication and transcription.Conclusion The mtDNA HV2 region is a highly polymorphic and mutatble region，that could be some relations in the breast carcinoma development. 　　Key words：Invasive ductual breast carcinoma；mtDNA；HV2；PCR-single stranded conformation polymorism 　　线粒体DNA（mitochondrial DNA，mtDNA）存在于细胞质的线粒体中，是细胞内唯一的核外遗传物质，由16569bp组成的双链闭合环状分子，含有自我复制、转录和翻译的遗传体系。mtDNA含有37个编码基因，包括编码氧化磷酸化系统13个蛋白质的亚单位、2个rRNA及22个tRNA的结构基因。由于不受组蛋白保护，修复功能不完善，很容易成为致癌物质攻击的标靶。因此mtDNA的突变与细胞癌变之间的关系已经越来越受到重视，成为研究的热点。本文利用PCR-SSCP和基因测序法对mtDNA D-loop环HV2区的基因突变情况进行了研究，并探讨了突变在乳腺癌进程中的作用。 　　1 资料与方法 　　1.1一般资料 取自2004年5月～2005年7月延边大学附属医院肿瘤外科手术的患者，20例乳腺癌组织及相对应的癌旁正常组织，手术后切除部分组织立即投入液氮中，后放入-80℃冰箱中保存备用。20例乳腺癌患者年龄为36～73岁，平均（51.15±9.54）岁，所选标本均经病理确诊为浸润性导管癌。 　　1.2方法 　　1.2.1组织DNA提取 应用小量组织DNA提取纯化试剂盒进行组织DNA的提取，并用1%琼脂糖凝胶电泳和核酸蛋白定量分析仪进行DNA提取及纯度检测。选用GeneAmp 2400型PCR扩增仪进行PCR扩增。引物序列为HV2：5'-CTC ACG GGA GCT