扇贝生物抗病功能基因的克隆与表达.pdfVIP

诅建ln 第三届海洋生物高技术论坛 2005．08．19-23 扇贝生物抗病功能基因的克隆与表达+ 宋林生’ 中国科学院海洋研究所，青岛266071 搐要：栉孔扇贝和海湾扇贝是我国的主要养殖贝类，近年来，随着海洋环境逐渐恶化和养殖的 规模化发展，病害问题已经成为严重制约贝类养殖业健康发展的主要障碍。从长远角度考 虑，我国扇贝养殖业健康可持续发展无疑将涉及到养殖环境的综合治理、抗病品种或品系的 选育以及高效、无毒、广谱新型药物的开发和研制。扇贝中抗病基因的克隆和表达无疑是研 究和开发新型天然抗菌物质以取代化学农药和抗菌素的新途径，同时也是研究扇贝免疫防御 机制，提高机体抗病力，实现遗传改良，选育抗病品种的基础和关键。本文综述了我们在扇 贝生物抗病功能基因的克隆表达与应用方面的研究进展，其中包括cDNA文库的构建、EST 分析，参与免疫识别、免疫信号放大和传导、转录激活的基因以及部分体液免疫因子基因的 克隆和表达。 关键词：扇贝，EST，免疫防御基因克隆，基因表达 l贝类养殖业面临的困境 扇贝是我国海水养殖f向上要贝类品种，从20IU：纪80年代后，扇贝养殖发展迅速，养殖 产量在1996—1997年曾一度达到百万吨。但是从1994年以来，养殖扇贝开始出现死亡现象， 并于1997年暴发了栉孔扇贝的大规模死亡，经济损失十分惨重。面对目益严重的养殖栉孔 扇贝病害问题，目前尚没有十分有效的解决办法，扇贝养殖业的健康和可持续发展正遭受严 重威胁。扇贝病害防治的上要困难在J二：(1)养殖扇贝在不同的发育阶段对特异性病原的易 感性不l划；(2)不同发育阶段病原不I刊，病原的致病机理也不同；(3)扇贝作为无脊椎动物缺 乏特异性免疫系统，无法使用特异性免疫学防治方法。在育苗期间大最使用抗菌素或化学农 药是目前白?苗和养殖单位普遍使用I，|勺J峨急措施，而抗菌素和农药的滥用势必会造成各种病原 耐药性的提高，从而又加大了病害防治的难度。另外，随着育苗用海水的排放，残留的农药 和抗菌素对环境也造成了严重污染，其后果是不堪设想的。养殖扇贝疾病的不断出现以及各 种疾病病冈的多样性迫切要求制定新的疾病防治措施，开发新型的抗菌物质或处理方法。 2海洋无脊椎动物抗病功能基因研究现状 目前的研究结果表明兀脊椎动物中没有特异性免疫系统，只存在原始的非特异性免疫系 统。在缺乏特异性免疫机制l，FJ情况下，尤脊椎动物依赖非特异性免疫来防御各种各样病原的 +863国家高技术研究发展计划(2002AA626020)和网家自然科学基金资助课题。 术通讯作者。Email：Ishsong@ms．qdh川：．(：n 603 i毽l玎 第三届海洋生物高技术论坛 2005．08．19-23 感染，维持机体的健康和正常的生命活动，从而保证了无脊椎动物界的繁荣。无脊椎动物的 防御系统包括细胞免疫和体液性免疫，细胞免疫主要是指血淋巴中血细胞对异物的吞噬、杀 灭和排除作用。体液性免疫主要包括血淋巴的溶菌作用、凝集作用、溶血作用等。体液性免 疫因子包括血淋巴中的各类抗菌冈子、抗病毒因子、血凝因子、细胞激活因子、识别因子、 凝聚素、溶血素、调理素及溶菌酶等各种具有免疫活性的酶类。这些免疫因子的作用在于识 别异物；通过凝聚、沉淀、包裹、溶解等方式抑制病原体的生长及扩散，或者直接将其杀灭 并排出体外；发挥涮理作用，促使血细胞更易于吞噬外来异物；另外还可以参与止血、凝固、 物质吸收与运输以及创伤修复等生理作用。 随着分子生物学技术的发展和不断完善，从海洋无脊椎动物中分离克隆参与抗病防御的 功能基因已成为国际海洋生物技术发展的一大热点，开发利用这些抗病基因也是该领域的一 大发展趋势。目前，已有多种参与免疫防御的抗病基因相继得到了克隆，这些基因参与了无 脊椎动物免疫防御的各个过程，其中包括免疫识别、免疫信号调理放大和传导、转录激活以 及对外源异物的清除等，比如多种模式识别受体、蛋白酶及其抑制剂、激酶、氧化还原系统 的各种酶、抗菌肽或抗菌蛋白、溶菌酶以及其他多种应急蛋白。这些基冈的克隆以及对其表 达特征和功能的研究极